檢測範圍
96T 0.03Eu/L–0.8Eu/L【使用目的】
本試劑盒用於測定大腸桿菌樣本中內毒素(endotoxin)含量。
實驗原理
本試劑盒套用雙抗體夾心法測定標本中大腸桿菌內毒素(endotoxin)水平。用純化的大腸桿菌內毒素(endotoxin)抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內毒素(endotoxin)，再與HRP標記的內毒素(endotoxin)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內毒素(endotoxin)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大腸桿菌內毒素(endotoxin)濃度。試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1.6Eu/L)0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1．標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。0.8Eu/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
0.4Eu/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.2Eu/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.1Eu/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.05Eu/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩乾，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍乾。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
操作程式總結
計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月
