單克隆抗體技術

單克隆抗體技術

一種免疫學技術,將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞雜交, 獲得既能產生抗體, 又能無限增殖的雜種細胞,並以此生產抗體。

基本概念

抗體主要由B淋巴細胞合成。每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細胞系,含遺傳基因不同的B淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時,抗原分子上的許多決定簇分別激活各個具有不同基因的B細胞。被激活的B細胞分裂增殖形成該細胞的子孫,即克隆由許多個被激活B細胞的分裂增殖形成多克隆,併合成多種抗體。如果能選出一個製造一種專一抗體的細胞進行培養,就可得到由單細胞經分裂增殖而形成細胞群,即單克隆。單克隆細胞將合成一種決定簇的抗體,稱為單克隆抗體。

基本原理

其原理是: B淋巴細胞能夠產生抗體, 但在體外不能進行無限分裂; 而瘤細胞雖然可以在體外進行無限傳代, 但不能產生抗體。將這兩種細胞融合後得到的雜交瘤細胞具有兩種親本細胞的特性。

步驟

一.提取合成專一性抗體的單個B淋巴細胞,但這種B淋巴細胞不能在體外生長。

二.套用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合,得到雜交瘤細胞。這種細胞既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性,也有骨髓瘤細胞能在體外培養增殖永存的特性

三.對雜交瘤細胞進行細胞培養,選出所需要的細胞群,體外或體內培養,從培養液或動物腹水中提取單克隆抗體

單克隆抗體的提純

一般常用金黃色葡萄球菌蛋白A-瓊脂糖4B親和層析法。

單克隆抗體的保存 由腹水中獲得的抗體,經離心去除細胞成分,再經冷凍超速離心,取上清液加0.1%NaN3,少量分裝,冷凍於-70℃可保存幾年。 但應避免反覆凍融,否則抗體失活,特別是IgM抗體。提純的單克隆抗體,冷凍乾燥保存於2~8℃,取出時溶解後,保存於2~8℃,至少一個月內可保持穩定。腹水抗體也可冷凍乾燥低溫(4℃)保存兩年,融化後放置4℃下保存一個月。短期使用的腹水抗體,4℃3~4 個月仍保持穩定, 培養上清加0.1%NaN3,貯於-20℃,兩年不失活性。

特點

一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。

二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。

三是定向性,抗體藥物可以定向製造,就是根據需要製備具有不同治療作用的抗體藥物。基於這些特點,我們可以用來製成“生物飛彈”運送藥物至病害部位,主要是癌細胞,從而達到治療效果。

製備圖

製備圖製備圖

單克隆抗體在臨床上的套用

單克隆抗體技術單克隆抗體技術

單克隆抗體用於臨床診斷和治療,目前研究較多的是抗人 T細胞單克隆抗體,用以識別人T細胞表面的不同抗原決定簇,有OKT系統及Leu系統。T細胞,特別是免疫調節T細胞(Ti/h及Tc/s細胞)對於調控免疫應答和維持免疫自穩起著至關重要的作用,臨床上許多疾病的發生與免疫調節失常有關,因此,研究 T細胞在這些疾病中的變化,有助於探討病因和輔助診斷。各種免疫缺損病、腫瘤或感染性疾病都與免疫功能低下有關,而變態反應性疾病、自身免疫性疾病等與免疫功能亢進有關。因此套用 OKT系列單克隆抗體檢測這些疾病患者外周血中T細胞亞群及T4/T8比值的變化,對探討發病機理,及時診斷疾病及監測病情發展有十分重要的意義。接受腎移植或骨髓移植的患者往往需套用各種免疫抑制劑以控制排斥反應, T細胞亞群的檢測有助於了解移植器官的排異和發展。抗人T細胞單克隆抗體可用以治療白血病、移植物抗宿主反應(GVHD)和急性腎排斥等,目前尚處於摸索階段。

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