化學損毀技術

化學損毀技術，對軸膜上胺攝取機制中的載體有高度親和力。

化學損毀技術
外科切除、電解、燒灼均為非選擇性損毀法，後來發現特異性物，如蓖麻蛋白損毀周圍神經、谷氨酸單鈉選擇性損毀正丘腦弓狀核神經元，用3-乙醯吡啶選擇性損毀下橄欖核神經元，鵝膏蕈氨酸損毀尾殼核的膽鹼能神經元，6-OHDA損毀中樞CA神經元；5，6-和5，7-雙羥色胺可作為5-HT化學切割劑。辣椒素對辣椒素敏感的C類神經元具有選擇性破壞性作用。
6-OH原理：（！）其對軸膜上胺攝取機制中的載體有高度親和力（2）其很易自我氧化形成毒性分子，如苯醌而引起神經潰變。實驗表明軸突末梢最敏感，而胞體最不敏感。在CA能神經元中，對NE能神經元的作用又大於DA能和腎上腺素能神經元。經6-OHDA作用的NE能神經元，可產生半永久性的損毀。
6-OHDA只有達到閾濃度（50-100mmol/L）才有神經毒性，低於此濃度可被神經元報取作為假遞質。末梢給予6-OHDA 1-4h後即有超微結構的改變，1-2h即有螢光組化的改變，軸突末梢螢光消失。若腦室注射，需數天才可。由於6-OHDA不能透過BBB，故只有腦內注射才可引起CA神經元的潰變。其中藍斑最敏感，外側被蓋NA最不敏感。黑質---紋狀體敏感，中樞腎上腺能神經對6-OHDA不敏感。
交感神經切除術與軸突切除術之6-OHDA溶液製備方法相同，注射劑量也相同（100mg/kg）。新生小鼠出生後24h開始ip，每日一次，共10天。小鼠精心餵養觀察。當出生後24h同窩小鼠開始注射，注射容量開始時0.02ml，隨體重比例性增加可至0.1ml。應適度調節6-OHDA濃度，以保持劑量的恆定。注意一月齡時斷奶分籠飼養。在最後一次6-OHDA處理後7-10周進行實驗。大鼠腦室注射濃度一般為20-50μl( 200μg).紋狀體中注射6-OHDA製成PD模型，藥物配製方法：6-OHDA10μg，溶於5μl含質量分數為0.2%抗壞血酸的生理鹽水中，注入紋狀體，注射速度為0.5μl/min，注畢留針5min，並以1mm/min速度緩慢退出。
6-OHDA選擇性高，對膽鹼能神經和5-HT神經元幾乎無作用，但在中樞有一定的非特異性攝取，因而在中樞套用6-OHDA時，為防止5-HT神經元的攝取，往往先ip注射去甲丙咪嗪（desimipramine），以抑制5-HT神經末梢對6-OHDA的攝取，保護5-HT神經元不受6-OHDA的損害。而外周套用多不必注射丙咪嗪，可能與外周神經分布有關。
如：（倫學慶，章翔，張劍寧，等。中國病理生理雜誌 1999；15（2）：188-190）註：為什麼用Vit C配製，調節pH值？
相關文獻：Angeletti PY, R Levi-Montalcini. Sympathetic nerve cell destruction in newborn mammals by 6-hydroxy-dopamine, Proc. Natle Acad Sci, 1970,65:114
對5-HT神經元。5，6-DHT和5，7-DHT可在5-HT神經元中選擇性積聚，並自身氧化成毒性物質。而PCAM對上行性5-HT作用強，機制不明。但5，6-HT和5，7-HT不能透過BBB，但PCAM（氯苯丙氨，or pCPA）可以，故可作腹腔注射。一般5，6-DHT 75μg，i.c.v，可使脊髓中5-HT含量降低85%左右。若選擇性損傷腦中5-HT，可小劑量5，6-DHT注入中腦被蓋的腹 內側以損毀5-HT上行纖維，該法使前腦5-HT含量降低70%-80%，而延橋腦和脊髓不受影響。，但缺點是前腦DA含量發生一過性下降（下降30%，5d恢復），NA含量則升高50%。若用5，7-DHT，毒性小，劑量可增加一倍，大鼠 150μg，i.c.v可使脊髓5-HT含量下降90%以上，前腦、腦幹分別下降80%和60%，缺點是對NA纖維也有較強的親和力，使腦內NA下降50%，54d尚未恢復。一般5，6-DHT注射1-3d後，5-HT纖維及其末梢被破壞，接近末梢處的軸突變粗，直徑可達3-15μm，有大量橙、黃或棕色螢光物質堆積，據此可追蹤 5-HT纖維走行。而pCPA給大鼠腹腔注射300mg/kg，或每日100mg/kg，連續3d，可使腦內5-HT含量下降80-90%，給藥2-3d達歸低點，1w後開始恢復，2w後基本恢復。由於其只抑制TPH，不抑制5-HTPDC，從而注射後可重新恢復，使之成為理想的工具藥。但不足的是其對酪氨酸羥化酶（TH）也有輕度抑制作用。注射後1-6d內，腦NA含量下降10%-20%。另外還有對氯苯丙氨（PCA），可使腦內5-HT下降60%達4月之久，但其降低幅度低，且作用環節複雜，非理想工具藥。
免疫交感神經切除術
NGF是感覺和外周神經元是一種特異性神經營養因子。一般認為NGF-7S含有5個亞單位（2α、1β、2γ），僅β亞單位具有神經營養活性。NGF-2.5S實質即是NGF-7S的β亞單位。
一般交感神經切除方法有：藥物性切除、手術性切除和免疫性切除。但手術一般很難切除完全，藥物阻斷，往往藥效不單一，具有多種藥理作用。而免疫切除指採用神經營養因子抗血清進行注射。
新生的大鼠或小鼠，在生後24-48h，將NGF抗血清（效價在1/1000~1/2000），按0.05ml/g體重劑量皮下注射，每日一次，連續注射1~2周（應有對照組）。新生鼠長至2~3月齡時，組織學檢查交感神經幾乎是永久性破壞。但其體重體溫、活動、飲食、生育能力完全正常。在麻醉下心率約400次/分，與正常大鼠一致。平均靜止血壓為70mmHg，低於正常大鼠100mmHg。刺激右迷走神經外周端，與正常組動物比較，二者心率都顯著減慢，但對注射NA或腎上腺素的升壓作用較正常動物強三倍。表明它們對CA的作用具有較大的延長。而且通過這樣處理過的大鼠交感神經幾乎完全失去，即使殘存，也比對照組動物放電的電位幅顯著降低。免疫切除交感神經的大鼠心脾肺內的NA含量顯著減少，但CNS內未見顯著變化，中樞神經系統內也未見任何形態變化。可見這是一種較理想的交感神經切除方法。
但要注意一些點：（1）新生鼠皮下脂肪太薄，注射NGF抗血清易從針孔處漏出，為防止漏出，所以一定要慢。（2）成年動物套用抗血清，其作用要小得多。對成年小鼠重複套用NGF抗血清，直到一個月，僅引起交感神經切的中度萎縮（約40%），故NGF抗血清應套用於新生鼠。（3）應注意是何種抗血清，應分清種屬之間的差異。如Sigma採用的是兔抗鼠NGF血清。