五百人大廳始建於1494年，由薩佛納羅拉委託西蒙・德爾・波拉尤奧洛（Simone del Pollaiolo）和弗朗西斯・多梅尼科（Francesco di Domenico）修建。按照薩沃納羅拉的嚴格原則，房間很簡潔，幾乎毫無裝飾。當時，來自費拉拉的修士薩沃納羅拉在皮耶羅二世（德・美第奇）被驅逐後，成為佛羅倫斯共和國事實上的統治者。在佛羅倫斯的這個地方，他舉行共和國大會，議會由500名成員組成。
在1865年，佛羅倫斯成為義大利的首都，這一決定是前一年的9月會議，由拿破崙三世在巴黎簽署。這是一個政治決定，也有象徵意義。從1865年至1871年，在五百人大廳是十六世紀義大利議會舉辦會議的地點，佛羅倫斯的城市發展和社會作用都被強制提升和修改，在這個城市的新來港定居人士大約15萬居民。
16世紀初，達文西和米開朗基羅這兩位文藝復興的藝術大師有機會在此分別創作巨幅壁畫《安吉里之戰》和《卡辛那之戰》。但是都未能完成自己的作品：達文西嘗試蠟畫技術失敗，而米開朗基羅被儒略二世召往羅馬。原作都失去了，但有複製品和草圖。其巨大的側壁上放置的裝飾，雕塑和繪畫作品，美麗的格子天花板使該大廳驚人的美麗。
