SOD Assay Kit - WST

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SOD Assay Kit - WST是由日本同仁化學研究所(Dojindo)開發的檢測超氧化物歧化酶(SOD)活性的試劑盒,它具有以下特點:

1、靈敏度高,結果準確可靠

2、操作簡便,重複性好

3、採用96孔板檢測,省時省力

4、可一次檢測多個樣品

5、採用WST染色方法,可以測定100% SOD抑制率

6、眾多SCI論文支持

專利

WST®:WST是日本同仁化學研究所的註冊商標

原理

超氧化物歧化酶(SOD)能夠催化超氧陰離子(O2·-)歧化,生成過氧化氫以及單質氧,是一種重要的抗氧化酶。哺乳動物細胞溶質中的SOD呈綠色,並且由兩種亞單位構成,一種含有銅,另一種含有鋅(Cu/Zn-SOD)。線粒體和細菌SOD為紅紫色並含有錳(Mn-SOD)。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。

Concentration of SOD(U/ml) Concentration of SOD(U/ml)
反應原理 反應原理

為了測定SOD的活性,研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法,其中,NBT的間接法最為常用,因為它很方便。但是,NBT法有幾個缺點,例如生成的染料水溶性差,而且會和黃嘌呤氧化酶的還原型發生反應。雖然cytochrome C法也常被用來做SOD檢測,但它和超氧化物反應過於劇烈,不能測定低水平的SOD。SOD Assay Kit-WST®使用了Dojindo自己發明的易溶於水的噻唑鹽:WST®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氫-四唑鹽,二鈉鹽),能夠和超氧陰離子反應生成水溶性的染料,因此可以簡便地進行SOD的檢測。WST®-1與超氧陰離子反應的劇烈程度比cytochrome C小70倍;因此,它的檢測靈敏度非常高,並且能夠通過將樣品用buffer稀釋,使背景的吸光度最小化。WST®-1不會和黃嘌呤氧化酶的還原型發生反應,因此,能夠檢測SOD100%的抑制率。WST®-1被超氧陰離子還原的比率與黃嘌呤氧化酶的活性線性相關,並且會被SOD所抑制(見下圖)。因此,SOD或者SOD類似物的IC50(50%的抑制濃度)就能用比色法來測定。

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