概念解讀
放射免疫測定/放射免疫分析(Radio immunoassay orradioimmunoassay,RIA)
基本原理
在放射免疫分析的實驗中,加入超量的標記抗原*Ag與未標記抗原Ag(即: 待測抗原)與較少量的抗體(Ab)競爭性結合。
如果實驗結果所計量到的結合物(*Ag-Ab)放射活性較高,表示待測物的濃度較低。
如果所計量到的結合物放射活性較低,則表示待測物的濃度較高。 藉由標準 曲線圖的分析,可以推算出待測物的濃度。
1960年,美國學者Yalow 和Berson 創立了放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA),並首先用於糖尿病人血漿中胰島素含量的測定。這是醫學和生物學領域中方法學的一項重大突破,開闢了醫學檢測史上的一個新紀元。它使得那些原先認為是無法測定的極微量而又具有重要生物學意義的物質得以精確定量,從而為進一步揭開生命奧秘打開了一條新的道路,使人們有可能在分子水平上重新認識某些生命現象的生化生理基礎。其後30年中,內分泌科學的飛速進展,充分證明了這一超微量分析技術的巨大推動力。1977年,這項技術的發明者榮獲諾貝爾生物醫學獎。隨後這一嶄新的技術迅速滲透到醫學科學的其它領域,如病毒學、藥理學、血液學、免疫學、法醫學、腫瘤學等,以及與醫學生物學相關的學科,如農業科學、生態學及環境科學等。放射免疫分析的物質,由激素擴大到幾乎一切生物活性物質。我們放射免疫分析研究起步於1962年,並迅速發展與普及,對我國生物醫學的進展起著很大的促進作用。
優缺點
(一)RIA的優點
放射免疫分析具有許多其它分析方法無可比擬的優點。它既具有免疫反應的高特異性,又具有放射性測量的高靈敏度,因此能精確測定各種具有免疫活性的極微量的物質。
1.靈敏度高一般化學分析法的檢出極限為10~10g,而RIA通常為10(毫微克,ng)、10g(微微克,pg),甚至10g(毫微微克,fg)、10g(微微微克,ag)。
2.特異性強由於抗原—抗體免疫反應專一性強,所被測物一定是相應的抗原。良好的特異性抗體,能識別化學結構上非常相似的物質,甚至能識別立體異構體。
3.套用範圍廣據不完全統計,目前至少已有300多種生物活性物質已建立了RIA。它幾乎能套用於所有激素的分析(包括多肽類和固醇類激素),還能用於各種蛋白質、腫瘤抗原、病毒抗原、細菌抗原、寄生蟲抗原以及一些小分子物質(如環型核苷酸等)和藥物(如地高辛、毛地黃甙等)的分析,套用範圍還在不斷擴展。近年來由於小分子半抗原製備抗體的技術有很大的發展,有人預測幾乎所有的生物活性物質,只要其含量不低於RIA的探測極限,都可建立適當的RIA法。
4.操作簡便RIA所需試劑品種不多,可製成配套試劑盒;加樣程式簡單一次能分析大量標本,標本用量也少;反應時間不長;測量和數據處理易於實現自動化;RIA屬體外分析技術,對患者無任何輻射危害。
(二)RIA的缺點
1.只能以免疫反應測得具有免疫活性的物質,對具有生物活性百失去免疫活性的物質是測不出的。因此RIA結果與生物測定結果可能不一致。
2.由於使用了生物試劑,其穩定性受多種因素影響,需要有一整套質量控制措施來確保結果的可靠性。
3.靈敏度受方法本身工作原理的限制,對體內某些含量特別低的物質尚不能測定。
4.由於放射免疫分析是競爭性的反應,被測物和標準物都不能全部參與反應,測得的值是相對量而非絕對量。
5.存在放射線輻射和污染等問題。
儘管RIA存在以上缺點,但它畢竟是定量分析方法的先進技術。隨著科學技術的進步,放射免疫分析技術將會得到更加廣泛、更加深入的發展。