特性
P. Edman降解測序主要涉及耦聯、水解、萃取和轉換等4個過程。首先使用苯異硫氰酸酯(PITC)在pH9.0的鹼性條件下對蛋白質或多肽進行處理,PITC與肽鏈的N-端的胺基酸殘基反應,形成苯氨基硫甲醯(PTC)衍生物,即PTC-肽。然後PTC-肽用三氟乙酸處理,N-端胺基酸殘基肽鍵被有選擇地切斷,釋放出該胺基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接下來將該衍生物用有機溶劑(例如氯丁烷)從反應液中萃取出來,而去掉了一個N-端胺基酸殘基的肽仍留在溶液中。萃取出來的噻唑啉酮苯胺衍生物不穩定,經酸作用,再進一步環化,形成一個穩定的苯乙內醯硫脲(PTH)衍生物,即PTH-胺基酸(下圖)。
留在溶液中的減少了一個胺基酸殘基的肽再重複進行上述反應過程,整個測序過程現在都是通過測序儀自動進行。每一循環都獲得一個PTH-胺基酸,經HPLC可以鑑定出是那一種胺基酸。Edman降解的最大優越性是在水解除去末端標記的胺基酸殘基時,不會破壞餘下的多肽鏈。
當蛋白質中含有一個或多個半胱氨酸殘基時,有時一對半胱氨酸殘基會通過二硫鍵交聯。在這種情況下測序,首先要經過處理(如用過甲酸處理)切斷二硫鍵,然後再進行Edman降解測序。