DEAE-纖維素

DEAE—纖維素的活化稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。

簡介

英文名稱:DEAE c
DEAE-纖維素
ellulose DE-23
CAS號:9000-11-7
功能團二乙氨乙基
正常PH範圍:2~9.5
小離子電量:0.88~1.08meg/dg(dg=dry gram,千克重)
蛋白容積:425mg/dg(蛋白體積是指0.01M ph8.5磷酸緩衝液—牛血清白蛋白
蛋白容積/柱體積:60mg/ml每升所需的離子交換劑㎏
柱床體積:0.19(離子交換劑重量的數字考慮到溶脹,容易去除及使用過程中離子離子交換剩餘顆粒)
填料密度:0.15dg/ml(填料密度的狀態為0.05M PH7.5磷酸緩衝液)
性狀:乾燥纖維狀
用途:用於柱色譜分析,用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等,陰離子交換填料
保存:常溫乾燥封袋保存

使用方法

DEAE—纖維素的活化

稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹後DEAE的體積。根據所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。抽乾,改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽乾(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩衝液,浸泡平衡後使用。

DEAE—纖維素的再生

用過的離子交換劑可以反覆使用,使其恢復原狀的方法俗稱“再生”。再生並非每次用反覆處理,通常只要“轉型”處理即可。所謂轉型就是使交換劑帶上所希望的某種離子,如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用nh4oh浸泡,如希望陰離子交換劑帶上Cl—則用NaCl溶液處理。本實驗中DEAE—纖維素在酸鹼處理後,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩衝溶液浸泡即可轉型,以HPO4取代DEAE中的OH—。一般由於DEAE—纖維素使用後因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5ml/L NaOH浸洗,用去離子水洗至pH8左右,再轉型,即可再使用。

核苷酸

核苷酸Nucleotide,一類由嘌呤鹼或嘧啶鹼、核糖或脫氧核糖以及磷酸三種物質組成的化合物。又稱核甙酸。戊糖與有機鹼合成核苷,核苷與磷酸合成核苷酸,4種核苷酸組成核酸。核苷酸主要參與構成核酸,許多單核苷酸也具有多種重要的生物學功能,如與能量代謝有關的三磷酸腺苷(ATP)、脫氫輔酶等。
核苷酸類化合物具有重要的生物學功能,它們參與了生物體內幾乎所有的生物化學反應過程。現概括為以下五個方面:
① 核苷酸是合成生物大分子核糖核酸 (RNA)及脫氧核糖核酸(DNA)的前身物,RNA中主要有四種類型的核苷酸:AMP、GMP、CMP和UMP。合成前身物則是相應的三磷酸核苷ATP、GTP、CTP和UTP。DNA中主要有四種類型脫氧核苷酸:dAMP、dGMP、dCMP和dTMP,合成前身物則是dATP、dGTP、dCTP和dUTP。
② 三磷酸腺苷 (ATP)在細胞能量代謝上起著極其重要的作用。物質在氧化時產生的能量一部分貯存在 核苷酸ATP分子的高能磷酸鍵中。 ATP分子分解放能的反應可以與各種需要能量做功的生物學反應互相配合,發揮各種生理功能,如物質的合成代謝、肌肉的收縮、吸收及分泌、體溫維持以及生物電活動等。因此可以認為 ATP是能量代謝轉化的中心。
③ ATP還可將高能磷酸鍵轉移給UDP、CDP及GDP生成UTP 、CTP及GTP。它們在有些合成代謝中也是能量的直接來源。而且在某些合成反應中,有些核苷酸衍生物還是活化的中間代謝物。例如,UTP參與糖原合成作用以供給能量,並且 UDP還有攜帶轉運葡萄糖的作用。
④ 腺苷酸還是幾種重要輔酶,如輔酶Ⅰ(煙醯胺腺嘌呤二核苷酸,(NAD+)、輔酶Ⅱ(磷酸煙醯胺腺嘌呤二核苷酸,NADP+)、黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)及輔酶A(CoA)的組成成分。NAD+及 FAD是生物氧化體系的重要組成成分,在傳遞氫原子或電子中有著重要作用。CoA作為有些酶的輔酶成分,參與糖有氧氧化及脂肪酸氧化作用。
⑤ 環核苷酸對於許多基本的生物學過程有一定的調節作用。

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