酶試劑

酶試劑

臨床實驗室測酶活性時使用的化學藥劑統稱,常用來測試酶的活性,整個反應過程呈曲線變化。

活性濃度

酶試劑酶試劑
早期臨床實驗室測酶活性時常使用比色法,先讓酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,然後停止酶反應,加入試劑進行化學反應呈色測出底物和產物的變化。由於比色法靈敏度較低,或由於手工操作不易控制好,常定在30分鐘左右。歷史上這類方法常被命名為“終點法”、“二點法”、“固定時間法”和“取樣法”。大多數文獻使用“固定時間法”。此命名指出了用這類方法測酶活性濃度,必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要很精確,否則將引起較大誤差。但“取樣法”的命名更具有特徵性。因它指出此類方法和下面將提到的另一類連續監測法相比較,最基本一點的是此類方法停止反應後才測底物或物的變化。很難進行連續監測,而另一類方法則不需停止酶反應,就可測定反應物的變化,很容易觀察到反應的整個過程。後一類方法開始於50年代,Warburg首先用分光光度計。在340nm處直接監測到反應物NADH的動態變化過程。由於不停止酶反應,不需添加其它呈色試劑。

反應進程

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在酶作用下,底物[S]濃度不斷下降,隨之有相應產物[P]產生。不少酶在反應一開始的階段,由於各種因素影響,反應速度較慢,稱為延滯期,隨後在過量濃度的底物存在條件下,酶反應以恆定的速度進行,不受底物濃度變化的影響,這段反應稱為線性反應期或零級反應期。隨時間延長,反應速度除與酶量有關,還與底物濃度有關。即v=k(a-x),式中a為原來底物濃度,x為消耗的底物濃度,如反應物濃度項上指數為1,稱為一級反應,假如反應速率受二種或二種以上物質濃度的影響,則各個反應物濃度項上指數總和作為反應級數,可以分別為一級、二級或多級反應,總的將這段反應時期稱為非線性反應期。

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