血清脂蛋白電泳

血清脂蛋白電泳

①30ml/L醋酸溶液:用於麗春紅染色的漂洗。 (5)染色:通電完畢,取下薄膜直接浸於麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min 麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉,加入量同上法。

簡要概述

拼音:xuè qīng zhī dàn bái diàn yǒng
英文名稱:Serumlipoproteinelectrophoresis
用途:脂蛋白電泳主要用於高脂蛋白血症分型,也有助於了解冠心病的血脂狀態,更好地指導臨床診療工作。
分類:血液生化檢查、脂類測定

基本原理

脂蛋白是在鹼性pH條件下,以瓊脂糖凝膠或醋酸纖維條帶作為載體,從陽性方向來進行分離的。形成的蛋白區帶可以用脂肪染料如蘇丹黑或者油紅染色,它們只用於脂蛋白染色。在瓊脂中可能會有附加的聚陰離子和二價陽離子沉澱。脂蛋白沉澱帶用光密度計可立即定量分析。脂蛋白區帶也可以被切開後重新溶解,對各區帶進行膽固醇濃度的直接酶法檢測。另外,有報導在用薄層瓊脂糖凝膠上進行電泳分離後,可直接檢測各脂蛋白組分中的膽固醇含量的方法。

檢測試劑

(1)巴比妥-巴比妥鈉緩衝液(pH8.6±0.1、μ=0.06):以巴比妥2.21g、巴比妥鈉12.36g於500ml蒸餾水中,加熱溶解,待冷卻至室溫後加蒸餾水至1000ml。
(2)染色液:
①麗春紅S染色液:麗春紅9.04g、三氯醋酸6g,用蒸餾水溶解,並稀釋至100ml。
氨基黑10B染色液:氨基黑10B0.1g,溶於無水乙醇20ml中,加冰醋酸5ml,甘油0.5ml使溶解。然後將磺柳酸2.5g,溶於少量蒸餾水中,加入前液,再以蒸餾水補足至100ml。
(3)漂洗液:
①30ml/L醋酸溶液:用於麗春紅染色的漂洗。
②甲醇45m,冰醋酸5ml和蒸餾水50ml混勻。用於氨基黑10B染色的漂洗。
(4)透明液:檸檬酸(C6H5Na3O7·2H2O)21g和N-甲基-吡咯烷酮150g,用蒸餾水溶解,並稀釋到500ml。亦可選用氫萘或液體石蠟透明。 
(5)0.4mol/L氫氧化鈉溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液。

操作方法

(1)將緩衝液加入電泳槽內,調節兩側槽內的緩衝液,使其處於同一平面。
(2)醋酸纖維素薄膜的準備:取醋酸纖維素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(負極側)1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線,做點樣標記。編號,並標明正、負極後,將薄膜置於巴比妥-巴比妥鈉緩衝液中浸泡,待充分浸透後(一般為20min)取出,夾於潔淨濾紙中間吸去多餘的緩衝液。
(3)將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼於電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無溶血血清3~5μl於橫線處沿橫線加樣,樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離,以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形,待血清滲入薄膜後,反轉薄膜,使光面朝上,平直地貼於電泳槽支架上,用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩衝液連通,稍待片刻。
(4)接通電源,注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極,切勿接錯。電壓90~150V,電流0.4~0.6mA/cm(不同的電泳儀所需電壓,電流可能不同,應靈活掌握),夏季通電45min,冬季通電時間稍長,約為60min,電泳區帶展開約25~35mm即可。
(5)染色:通電完畢,取下薄膜直接浸於麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白區帶染透為止),然後在漂洗液中漂去剩餘染料,直至背景無色為止。 
(6)定量: 
①比色法:將漂洗的薄膜吸乾,剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml(計算時吸光度乘以2),其餘各管加3ml,振搖數次,置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度,然後計算出各管的含量(同時做空白管對照)。
麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉,加入量同上法。10min後,白蛋白管內加400ml/L醋酸0.6ml(計算吸光度時乘以2),其餘各管加0.3ml,以中和部分氫氧化鈉,使色澤加深,必要時離心,取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度(同時作空白對照),然後計算各自的含量。
②光密度計掃描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(為防止透明液被稀釋影響透明結果),將薄膜浸入透明液中2~3min,然後取出,以滾動的方式平貼於潔淨無劃痕的載物玻璃片上(切勿產生氣泡),將此玻片豎立片刻,除去多餘透明液後,置於恆溫90~100℃的烘箱內,烘烤10~15min,取出冷卻至室溫,用此法透明的各蛋白區帶鮮明,薄膜平整,可供直接掃描和永久保存(用氫萘或液體石蠟透明,應將漂洗過的薄膜烘乾後進行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易發生皺摺)。
③掃描定量:將已透明的薄膜放入全自動光密度計或其他光密度計暗箱內,進行掃描分析。

附註參考

樣本:可用新鮮、未冷凍的血清分離脂蛋白。血漿不適合用來做脂蛋白電泳,因為會出現一條纖維蛋白原區帶。 
帶有清晰的分離組分的脂蛋白圖形是進行準確解釋的先決條件。如果能夠很好地滿足這些條件,在脂蛋白電泳和參考方法(超速離心法)之間就可以相當一致。各組分的精密度不同,用變異係數表示,估計一般都在5%以下。 
偶爾α-脂蛋白會消失和(或)出現一條舌狀的窄的α-脂蛋白區帶。這是因為游離脂肪酸在α-脂蛋白上積聚,造成了這些微粒帶有電荷相等。由於α-區帶密度增大,從而導致結果偏高。和沉澱技術相比,定量脂蛋白電泳的耗資較高。

正常值

醋酸纖維薄膜電泳法:

乳糜微粒: 0g/L(0mg/dl)
極低密度脂蛋白: 0.06~0.3g/L(6~30mg/dl)
低密度脂蛋白: <7g/L(<700mg/dl)
高密度脂蛋白: 男:0.52±0.11g/L(43±18mg/dl)
女:0.55±0.13g/L(47±2mg/dl)

臨床意義

(1)原發性高脂血症的分型與原因見表1。

表1表1

(2)繼發性高脂蛋白血症與低脂蛋白血症的原因見表2。
表2表2

相關疾病

1、高脂血症 
2、繼發性高脂蛋白血症 

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