圖書信息
作 者： 茹炳根 譯 （澳）辛普森（Simpson，R.J） 編
內容簡介
蛋白質組學這一領域剛開始趨於成熟，而開展蛋白質組學研究首先要把蛋白質從複雜的大分子混合物中分離純化出來。為此，需要經過驗證並值得信賴的蛋白質分離純化方案以用於蛋白質組學研究。
原著“Purifying Protein s for Proteomics：A Laboratory Manual”由國際權威專家Richa rd J．Simpson聯合全球知名的專業實驗室共同撰寫，著名的美國冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory P ress)推出，是《蛋白質與蛋白質組學實驗指南》的姐妹篇。
以蛋白質組學中的蛋白質純化為核心。《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》的主要內容有：
★蛋白質純化和蛋白質組學的各種實用技術。包括專門用於蛋白質組學研究的製備技術、色譜方法和電泳技術，用於結構蛋白質組學研究的蛋白質純化分析技術等
★上述各種技術方法的背景資料、理論、實驗方案、疑難解答以及相關的支持性信息和參考資料
《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》儘可能完全地羅列了各種實驗方案，可供不同規模實驗室的研究者選擇套用。在介紹每一個實驗方案時，以“step-by-step”操作指南的形式逐步展開，詳細列出實驗儀器、試劑及操作步驟，並針對常見問題給出經驗性的提示或解決方案。
毫無疑問，對於蛋白質化學、生物化學的研究人員在蛋白質組學這一新興領域尋求最新的技術方法，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》是一部必備的實驗指南。而對於遺傳學、細胞生物學、分子生物學研究人員開展表型和細胞功能研究，以及醫學和生物工程領域開展蛋白質相關研究，《蛋白質組學中的蛋白質純化手冊》也是基本的實驗工具書。
目錄
第1部分：供蛋白質組學分析的蛋白樣品製備
第1章 分離科學在蛋白質組學中的作用
1.1 製備純化蛋白：蛋白質微陣和結構蛋白質組學的瓶頸
1.2 以質譜為基礎的蛋白質鑑定
1.3 蛋白質組學所面臨的一個關鍵技術的挑戰：減少樣品的複雜性
1.4 本書的概述
參考文獻
選讀文獻
網路資源
第2章 蛋白質的純化策略
2.1 挑戰
2.2 蛋白質的量和純度要求
2.3 重組蛋白通常能簡化純化過程
2.4 可根據蛋白質的內在特性來分離蛋白質
2.5 設計蛋白質純化方案
2.6 套用：膜相關抗原A33的純化
參考文獻
選讀文獻
第Ⅱ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的色譜方法
第3章 蛋白質和肽純化的色譜方法導論
3.1 基本概念
3.2 色譜·眭能
實驗方案
方案1輕拍一填裝法乾式填裝剛性固體柱
色譜術語表
參考文獻
選讀文獻
網路資源
第4章 全蛋白的多維色譜
4.1 MDLC用於蛋白質分級分離的目的
4.2 策略
4.3 主要文獻概述
4.4 MDLc的理論參數
4.5 色譜模式：正交性與相容性
4.6 與其他技術的性能比較
4.7 MDLC的常見問題
4.8 發展潛力
4.9 樣品處理方案：SEC/反相色譜法分離大腸桿菌蛋白
4.10 研究實例：MDLC分析酵母蛋白提取物
4.11 結論
參考文獻
第5章 可溶性重組蛋白的高通量篩選
5.1 引言
實驗方案
方案1 設計平行克隆表達載體
方案2 平行克隆所用載體的製備
方案3 黏末端PcR產物的製備和消化載體的連線
方案4 把DNA轉化到細菌中
方案5 誘導和篩選可溶性融合蛋白
參考文獻
第6章 離子交換色譜
6.1 IEC利用了分子間的靜電力
6.2 幾種IEC的模式
6.3 IEC中緩衝液的選擇很重要
6.4 離子交換介質和色譜分離裝置
實驗方案
方案1 離子交換柱的選擇
方案2 離子交換柱的製備
方案3 用IEC分離蛋白質
IEC柱的清洗
IEC的最佳化和常見問題
參考文獻
網路資源
離子交換介質的供應商
第7章 尺寸排阻色譜
7.1 小分子更易進入凝膠介質間的空隙
7.2 分配係數Kd和有效分配係數K描述了溶質在特定凝膠中的洗脫情況
7.3 SEC分離相似形狀分子的能力取決於凝膠的選擇範圍
7.4 分子的形狀對其洗脫時間的影響
7.5 影響洗脫蛋白解析度的因素
7.6 SEC在純化方案中的作用
7.7 SEC中緩衝液、溶液和試劑的配製
7.8 SEC中蛋白樣品和肽樣品的預處理
7.9 SEC液相色譜裝置
7.10 利用SEC分離純化的例子
實驗方案
方案1 尺寸排阻色譜柱的填裝
方案2 尺寸排阻色譜的製備
附加方案：分析性尺寸排阻色譜
方案3 用尺寸排阻色譜進行蛋白質的脫鹽和緩衝液的更換
柱的清洗和保養操作
關於SEC的常見問題
參考文獻
第8章 反相高效液相色譜在蛋白質分離和純化中的套用
8.1 ：RP-HPLC的特點與機制
8.2 分離機制
8.3 RP-HPLC基於“疏水腳”的細微差異分離多肽
8.4 RP-HPLC柱的特點與操作
8.5 流動相
8.6 溫度
8.7 表面活性劑對反相分離的影響
8.8 在質譜鑑定前用RP-HPLC分級分離多肽
8.9 RP.HPLC常見問題指南
實驗方案
方案1 RPHPLC分離蛋白質的標準色譜條件
方案2 RP-HPLC分離多肽的標準色譜條件
參考文獻
選讀文獻
網路資源
第9章 疏水相互作用色譜
9.1 HIC與RP-HPLC的區別
9.2 HIC的基本原理
9.3 實驗的影響因素
實驗方案
方案1 用HIC分離蛋白質
參考文獻
第10章 親和色譜與免疫親和色譜
10.1 親和色譜的實際套用
10.2 凝集素親和色譜
10.3 配基親和色譜
10.4 免疫親和色譜
10.5 DNA親和色譜
10.6 共價色譜
10.7 採用巰基一二硫鍵互換反應的共價色譜
實驗方案
方案1 凝集素一瓊脂糖凝膠親和色譜
方案2 蛋白質配基親和色譜
方案3 製備抗體親和樹脂過程中抗體的定位
方案4 DNA親和柱的製備
方案5 DNA親和色譜
方案6 從僅被混有不可逆失活的亞磺酸氧化產物中以可逆失活混合的二硫化物形式純化木瓜蛋白酶
方案7 以瓊脂糖一谷胱甘肽一2一吡啶二硫化物凝膠作為填料的共價色譜
方案8 使用活化的Thiopropyl一Sepharose6B凝膠的共價色譜
參考文獻
網路資源
第11章 蛋白質組學研究中的染料配基親和色譜
11.1 方法的設計和最佳化
11.2 染料配基吸附劑的再生和儲存
實驗方案
方案1 染料在多羥基介質中的固定化
附加方案：固定化配基濃度的測定
方案2 通過結合目的蛋白的能力來篩選固定化染料
方案3 吸附條件的最佳化
方案4 洗脫條件的最佳化
方案5 分批式試管法計算吸附劑的有效容量
方案6 用染料配基親和色譜純化蛋白
11.3 研究實例：使用CibacronBlue3GA-Sepharose親和吸附劑純化重組甲酸脫氫酶
參考文獻
第12章 固定化金屬離子親和色譜
12.1 IMAC的基本原理
12.2 IMAC的基本操作
12.3 IMAC最常用於純化帶多聚組氨酸標籤的蛋白質
12.4 目的蛋白性質未知時可使用IMA
12.5 磷蛋白和磷酸肽的分離
實驗方案
方案1 IMAC預裝柱的準備
第13章 用羥磷灰石進行蛋白質色譜
第14章 色譜聚焦
第Ⅲ部分：蛋白質組學中製備蛋白樣品的電泳方法
第15章 電泳分離蛋白質策略導論
第16章 雙向凝膠電泳分離蛋白質
第17章 在MCE中通過等電位分段法進行高解析度雙向凝膠電泳來製備樣品
第18章 一種電泳純化蛋白質的方法：GradiflowBF400儀
第19章 用自由流動電泳技術純化蛋白質
第Ⅳ部分：用於結構蛋白質組學的純化蛋白的分析
第20章 已純化蛋白質鑑定方法導論
第21章 用質譜測定蛋白質的特性
第22章 分析超速離心：蛋白質大小、構象和相互作用
第23章 蛋白質構象穩定性的測定
第24章 表面電漿共振與質譜聯用：鑑定結合配體及描述相互作用
第25章 糖蛋白中糖的分析
附錄1 蛋白質結構概述
附錄2 蛋白質濃度的測定
附錄3 蛋白質溶液的濃縮
附錄4 蛋白質的儲存穩定性
附錄5 單向聚丙烯醯胺凝膠電泳
附錄6 疑難問題解決指南
附錄7 注意事項
索引
