該堂始建於1881年(清光緒七年),由美國監理會傳教士潘慎文在天賜莊(意為上帝所賜的地方)建造,名為首堂,有400個座位。
20世紀初,蘇州的基督徒人數增加,到1915年,監理會拆除了首堂,新建了一座建築面積1855平方米,有800座位的西式教堂,並為紀念衛理公會的創始人約翰·衛斯理而改名為聖約翰堂。聖約翰堂的設計者是美國人約翰.M.慕爾博士,與天賜莊聖約翰堂建築風格一致、面積大小一樣的目前還有兩座,一座在美國聖路易斯,一座在日本神戶。
諾貝爾物理學獎得主李政道博士的祖父李仲覃牧師(1870-1936)為該堂的首任華人主任牧師(教區長),毛吟槎、江長川、朱味腴、楊鏡秋等牧師亦相繼在該堂事奉。
1959年,蘇州基督教實行聯合禮拜,將聖約翰堂獻出,由蘇州市第一人民醫院租用。到1995年教會收回聖約翰堂,1996年10月開始按原貌修復,到1998年3月竣工。1997年先作為市基督教兩會辦公用房及蘇南義工培訓中心。2003年4月,終於被批准恢復為宗教活動場所。現每個主日早晨9點舉行主日崇拜。每月的第一個主日舉行聖餐禮拜。
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