本試劑盒是利用競爭ELISA方法,在酶標板微孔上預包被抗磺胺二甲基嘧啶抗原。檢測時,加入標準品或樣品溶液,磺胺二甲基嘧啶抗體及酶標記物,包被抗原和加入樣本中的磺胺二甲基嘧啶競爭性地與磺胺二甲基嘧啶抗體結合後,再與酶標記物形成抗原抗體複合物,用TMB底物顯色;加入反應終止液,在450nm波長酶標儀下進行檢測,樣品中的磺胺二甲基嘧啶濃度與吸收光強度成反比。
二、檢測範圍
本試劑盒是套用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較,能經濟、快速地檢測出肌肉、血清等中的磺胺二甲基嘧啶。
三、交叉反應率
與類似物的交叉反應率:
磺胺嘧啶(SD或SDZ)………………………… 100.0%
磺胺間甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶(SMM)………………202%
磺胺甲惡唑(smz)………………………………………… 150%
磺胺噻唑(ST) ………………………………………………80.0%
酞醯磺噻唑(PST)………………………………………73%
磺胺甲噻二唑…………………………………………… 110%
磺胺異惡唑(SIZ) …………………………………………… 95%
四、試劑盒組成
酶標板1塊,96孔/板
標準液6瓶(1ml/瓶):0 、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
抗體工作液 ………………………7ml
酶標記物 …………………………7ml
底物液A …………………………7ml
底物液B …………………………7ml
終止液 …………………………7ml
20X濃縮洗滌液 ………………40 ml
2X濃縮復溶液 ………………50 ml
說明書 ……………………………1份
五、 需要但試劑盒中不提供的器材和試劑
(1)設備
……微孔板酶標儀(450nm)
……振盪器、離心機
……微量移液器:20μl~200μl,100μl~1000μl
……容量瓶:100ml,500ml,1000ml
(2)試劑
……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、濃HCL 、NaH2PO4·2H2O
六、溶液的配製
樣本前處理需配製:
配液1:0.2M NaOH溶液
0.8gNaOH用去離子水100ml溶解
配液2:0.02M PB緩衝液
稱取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去離子水500ml溶解。
配液3:復溶液1×
2×復溶液在使用前請按1:1稀釋
(1份濃縮復溶液+1份去離子水)
配液4:洗滌液
將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用蒸餾水稀釋
(可按需配置)
七、樣本前處理方法
樣本處理前須知
處理任何樣本時,都須注意:
(1)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
(2)實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨,必須使用潔淨實驗器具,以避免污染干擾實驗結果。
樣本處理步驟:
(A)組 織(雞、鴨、豬肌肉/肝臟、雞蛋、魚、蝦等)
1. 取組織樣本用勻漿機10000r/min勻漿1 min。
2. 稱取3±0.05g勻漿物置離心管中,先加入3ml 0.02M PB充分振盪混勻,再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈,充分振盪5min,於15℃,4000r/min以上速度離心10min;
3. 移取2ml上層液體(約相當於1g的樣本)在50-60℃氮氣或空氣吹乾;
4. 加入1ml正己烷溶解乾燥的殘留物,再加入1ml稀釋後的復溶液強烈振盪混合30s,室溫4000r/min,離心5min,除去上層液;
5. 取20µl下層用於分析。
樣本稀釋倍數:1
(B) 血清樣本
1、將血樣本於室溫放置30min,於10℃,4000r/min以上離心10min,分離出血清或過濾血清;
2、取1ml血清,加入3ml 0.02 M PB緩衝液混合,混合30s;
3、取20µl用於分析。
樣本稀釋倍數:4 檢測下限:4ppb
十二、貯藏條件及保存期
貯藏條件:在2~8℃保存試劑盒
保存期:本試劑盒有效期為12個月。