插入型載體

插人型載體一般只含有一個限制性位點可供插人外源DNA 的載體,其DNA 已經失去了非必需區,僅保留了ECOR I的單一切點,而且這個切點又位於報告基因上,故在切開DNA並插人外源基因後,報告基因失活,即可依此進行重組體的篩選。

插人型載體可插人長度為10kb的外源DNA。屬於這類載體有入gt系列。入gt10在失去了非必需區的DNA的CI基因內保留Hind皿和ECORI單酶切位點,在當有外源DNA在這酶切位點插人時,使CI基因失活,感染hfI-大腸桿菌後可形成空斑。入gtll是在噬菌體DNA插人的lacZ基因末端設有單一的ECORI酶切位點。在此處插人外源基因,可表達B-半乳糖苷酶的融合蛋白,利用異性抗體或DNA測序方法可篩選重組DNA。這類載體適宜構建CDNA文庫。

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