由於PCR技術的套用,使得DNA 測序技術從過去的分子克隆後測序進入PCR直接測序。PCR產物在自動測序儀上電泳後測序。常用方法有:Sanger雙脫氧末端終止法;Maxam-Gilbert化學裂解法;DNA測序的自動化。目前DNA順序全自動雷射測定法是最先進的方法。
相關詞條
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引物
引物,是指在核苷酸聚合作用起始時,刺激合成的一種具有特定核苷酸序列的大分子,與反應物以共價鍵形式連線,這樣的分子稱為引物。引物通常是人工合成的兩段寡核苷...
類型 引物設計 設計要求 設計軟體 -
回折序列
需要實驗者根據已有的基因序列設計5‘和3‘RACE反應的基因特異性引物...’末端和3‘末端RACE反應的基因特異性引物(GSPs)。RACE引物的設計:基因特異性引物(GSPs)應該是: 23-28nt...
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甲基化特異性pcr
甲基化特異性pcr(Methylation-Specific PCR,MS-PCR)是一種特異位點甲基化檢測技術。
簡介 -
聚合酶鏈式反應
,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火...過程便可合成tRNA基因。”但由於當時基因序列分析方法尚未成熟,熱穩定...單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在72...
PCR的創建 PCR原理 反應準備 循環參數 步驟 -
片段分析
片段分析(Fragment analysis,FA)是一種分子生物學技術,這裡的片段特指以DNA或者cDNA為模板,由PCR過程所產生的,數目不等的核苷...
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EST序列
表達序列標籤(expressed sequence tags,ESTs)是一組短的、由大量隨機取出的 cDNA 庫克隆、經從 5' 或 3' 末端一次測...
簡介 原理 序列標籤 基因識別 物理圖譜 -
PCR擴增
依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR擴增儀 PCR是一種體外...,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;引物的延伸...的特異性決定因素為:①引物與模板DNA特異正確的結合;②鹼基配對原則...
基本原理 類別 步驟 優點 反應特點 -
聚合酶鏈反應
的各個領域,在分子克隆、法醫學鑑定、DNA序列分析、致病基因的檢測...、dNTP、模板和緩衝液(其中需要Mg2+) 引物 PCR 產物的特異性...擴增效率和特異性,同時儘可能抑制非特異性擴增。反應中的引物至少應含有...
簡述 發展歷程 原理 步驟 反應體系 -
等位基因特異性PCR
等位基因特異性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物與模板之間的鹼基錯配可以有效地抑制PCR反應,進而達到模板...
簡介 原理