平末端

平末端

平末端指DNA分子兩條 鏈在限制性內切酶作用下斷裂的位置是處在 一個對稱結構的中心,形成的一種平齊的末 端結構類型。大多數II型限制酶的識別序列 都是迴文結構,即以雙對稱軸按5'—3'方向 閱讀時,其鹼基順序都是相同的,所以當切割位點在對稱軸上,限制片段為平末端。具 有平齊末端的DNA可以連線,但連線效率 只有黏性末端連線效率的1%。(李英碧)

當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時,切開的DNA兩條單鏈的切口,是平整的,這樣的切口叫平末端。

平末端 平末端

被限制性內切酶切斷的DNA分子片段,需要一種特殊的酶——DNA連線酶來縫合,恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。E·coliDNA連線酶只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間連線起來,不能將雙鏈DNA片段平末端之間進行連線。而T4DNA連線酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端,又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端,但連線平末端之間的效率比較低。

提高平末端連線效率的措施

①提高T4DNA連線酶的濃度;②提高DNA片段的濃度;③降低ATP濃度,以增強連線物與DNA結合;④加入多胺化合物,如亞精胺,降低DNA的靜電排斥力;⑤加濃縮劑,如大分子排阻物聚乙二醇(PEG)、強水化物三氯化六氨鈷等。

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