基因槍法簡介
並在1987年,Vlein首先報導了套用此技術將TMV(菸草花葉病毒)RNA吸附到鎢粒表面,轟擊洋蔥
表皮細胞,經檢測發現病毒RNA能進行複製,並以同樣技術將CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯黴素乙醯轉移酶基因)基因導入洋蔥表皮細胞。現在,該技術已在菸草、水稻、小麥、黑麥草、甘蔗、棉花、大豆、菜豆、洋蔥、番木瓜、甜橙、葡萄等多種作物上成功。
基因槍分類
這一方法是依靠一種基因槍來幫助導入外源基因。基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒(金粒或鎢粒),將DNA吸附在表面,以一定的速度射進植物細胞,由於小顆粒穿透力強,故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組,從而實現穩定轉化的目
的。它具有套用面廣,方法簡單,轉化時間短,轉化頻率高,實驗費用較低等優點。對於農桿菌不能感染的植物,採用該方法可打破載體法的局限。基因槍的轉化頻率與受體種類、微彈大小、轟擊壓力、制止盤與金顆粒的距離、受體預處理、受體轟擊後培養有直接關係。
基因槍法操作
基因槍法: 將直徑4um的鎢粉或金粉在供體DNA中浸泡,然後用基因槍將這些粒子打入細胞、組織或器官中,具有一次處理多個細胞的優點,但轉化效率較低。另外這種方法也用於基因治療和抗體製備,並已取得初步成效。