析出物為晶體時稱為結晶;析出物為無定形固體稱為沉澱法。固相析出法主要有鹽析法,有機溶劑沉澱法,等電點沉澱法,結晶法等。
鹽析法
是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異,通過向溶液中引入一定數量的中性鹽,使目的物或雜蛋白以沉澱析出,達到純化目的的方法。
鹽析的機制:高濃度的中性鹽溶液中存在著大量的帶電荷的鹽離子,它們能夠中和生物分子表面的電荷,使之賴以穩定的雙電層受損,從而破壞分子外圍的水化層;另外,大量鹽離子自身的水合作用降低了自由水的濃度,從另一方面摧毀了水化層,使生物分子相互聚集而沉澱。
有機溶劑沉澱法
向水溶液中加入一定量親水性的有機溶劑,降低溶質的溶解度,使其沉澱析出的分離純化方法。
主要機理:
(1)親水性有機溶劑加入溶液後降低了介質的介電常數,使得溶質分子之間的靜電引力增加,聚集形成沉澱。
(2)水溶性有機溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度,壓縮了親水溶質分子表面原有水化層的厚度,降低了它的親水性,導致脫水凝集。
等電點沉澱法
兩性電解質,在溶液pH處於等電點(pI)時分子表面淨電荷為零,導致賴以穩定的雙電層及水化膜的削弱或破壞,分子間引力增加,溶解度降低。調節溶解的pH值,使兩性溶質溶解度下降,析出沉澱的操作。
結晶法
改變溶液的某些條件,使其中的溶質以結晶態析出的過程稱作結晶。
(一)鹽析結晶法
這是生化製藥中套用最多的結晶方法。其作用是通過向結晶溶液中引入中性鹽,逐漸降低溶質的溶解度使其過飽和,經過一定時間後晶體形成並逐漸長大。
(二)透析結晶
(三)有機溶劑結晶
(四)等電點結晶
(五)溫度誘導結晶
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