原理
放射自顯影的原理是利用放射性同位素所發射出來的帶電離子(α或β粒子)作用於感光材料的鹵化銀晶體,從而產生潛影,這種潛影可用顯影液顯示,成為可見的"像",因此,它是利用鹵化銀乳膠顯像檢查和測量放射性的一種方法。放射性核素的原子不斷衰變,當衰變掉一半時所需要的時間稱為半衰期。各种放射性核素的半衰期長短不同(表),在自顯影實驗中多選用半衰期較長者。對於半衰期較短的核素,應選用較快的樣品製備方法,所用劑量也應加大。
與染色技術聯合使用
用放射自顯影能夠研究的任何細胞特徵或抗原物質定位也可以用放射自顯影和免疫染色聯合進行研究。特別之處是同時進行抗原定位研究,操作過程直截了當。細胞用適當的方法進行放射性標記,接著進行固定和按所選用的免疫染色法進行染色(注意:此時樣品和洗滌後的溶液應該作為放射性物品處理)。然後對細胞樣品進行放射自顯影,可以同時進行顯影銀粒和免疫染色觀察。
放射自顯影與免疫染色聯合套用最常用於研究DNA合成與抗原定位表達之間的關係。這時細胞用3H_TdR標記後,進行免疫染色和放射自顯影。這個方法能夠敏感而精確地研究正在進行DNA合成的細胞中抗原表達的位置。儘管如此,一般情況下建議用雙標記法進行這類研究,在細胞培養基中加入BrdU標記新合成的DNA,接著用2種不同顏色染料標記的抗體按上述雙標記法進行細胞染色,其中抗體之一是針對BrdU的抗體(已經商品化),而另一種抗體是針對所研究的抗原。