通常情況下,其中至少有一種簡併引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱PCR反應,一般通過三次巢式PCR反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求,還可以根據第一次步移獲取的序列信息,繼續進行側翼序列獲取。
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