乙醯乳糖胺重複結構相關簡介
簡單介紹:
多肽：N-乙醯氨基半乳糖轉移酶家族是催化0-糖鏈起始反應的第一步酶，其活性與腫瘤密切有關。本文旨在建立酵母雙雜交技術平台，並對多肽：N-乙醯氨基半乳糖轉移酶2結構與功能關係進行初步研究。方法：1．利用PDB資料庫尋找 GalNAcT2模版，並用SWI -MODEL伺服器對 GalNAcT2進行空間結構模擬，對結果進行最佳化及PROCHECK檢測。2．利用PCR方法重組構建pGADT7一T2、pC-ADTT-T2F、pGADT7一T2R酵母雙雜交載體，醋酸鋰法轉化酵母AHl09菌株，並進行激活檢測。3．利用RT—PCR方法從人類胃癌SGC7901細胞中克隆出基質金屬蛋白酶14的鉸鏈區，並用酵母雙雜交方法驗證 GalNAcT2與MMPl4的鉸鏈區結構相互作用。結果：成功對 GalNAcT2進行同源模擬。構建了pGADT7一T2、pGADT7-T2F、pGADT7一T2R酵母雙雜交載體，並通過激活檢測，建立酵母雙雜交技術平台。從SGC7901細胞中克隆出MMPl4鉸鏈區結構，構建了MMPl4H-pGBKT7載體，對 GalNAcT2和IVlMPl4鉸鏈區進行酵母雙雜交驗證，結果成陰性。結論： GalNAcT2催化區包括三個結構域。 GalNAcT2通過激活檢測，能夠用於酵母雙雜交實驗。 GalNAcT2與MMPl4鉸鏈區酵母雙雜交實驗的陰性結果表明， GalNAcT2作為蛋白質與~VIPl4鉸鏈區可能無穩定的相互結合作用：但是作為一個酶，是否催化MMPl4鉸鏈區的0一糖基化，有待於進一步的深入研究。 關鍵字:糖基轉移酶,同源模擬,酵母雙雜交,激活檢測,基質金屬蛋白酶,基因克隆,腫瘤轉移
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人類多肽:N-乙醯氨基半乳糖轉移酶2蓖麻蛋白樣結構域的摺疊識別和結構模擬
丁向明;金美芳;仇灝;姜智;吳士良
目的 對人類多肽:N-乙醯氨基半乳糖轉移酶2蓖麻蛋白樣結構域進行三維結構預測。方法 利用網路結構模擬SWISS-MODEL伺服器進行結構模擬。結果 發現其採用的是β-三葉草摺疊方式,二級結構主要為β鏈,通過與模板蛋白的結構比較,對其可能的活性位點進行了預測。結論 該酶具有蓖麻蛋白樣結構域。
【作者單位】：蘇州大學醫學院生物化學與分子生物學教研室蘇州大學生物化學工程研究所 江蘇蘇州215007 (丁向明;金美芳;仇灝;姜智);蘇州大學醫學院生物化學與分子生物學教研室蘇州大學生物化學工程研究所 江蘇蘇州215007(吳士良)
【關鍵字】：結構模擬;蓖麻蛋白樣結構域;SWISS-MODEL
【基金】：蘇州大學醫學發展基金資助(2003007)
【分類號】：Q51
【DOI】：cnki:ISSN:1000-5749.0.2004-05-007
【正文快照】：
人類多膚:N一乙酞氨基半乳糖轉移酶(pp-Ga1NAc-T)是粘蛋白O一糖基化的起始酶,轉移GalNA。至粘蛋白,結構上可分為3個獨立的結構域:GTI結構域、Gal/GalNAc一T結構域和C末端的蓖麻蛋白樣結構域。過去人們一直認為前兩個結構域是催化結構域,在酶的催化活性上起著不可或缺的作用
