化學式
葡萄糖氧化酶的每個酶分子中含有兩分子FAD（黃素腺嘌呤=核苷酸）作為受氫體催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，並產生過氧化氫：
CHO COOH
| |
(CHOH)4 + O2 + H2O → (CHOH)4 + H2O2
| |
CH2OH CH2OH
（葡萄糖）-----------（葡萄糖酸(CHOH)4）
作用時，葡萄糖脫下的氫交給FAD，使之成FAD.2H，然後FAD.2H與氧作用，生成 H2O2。
試劑
1．0.1mol/L磷酸鹽緩衝液(pH7.0) 稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶於蒸餾水800ml中，用1mol/L氫氧化鈉(或1mol/L鹽酸)調pH至7.0，用蒸餾水定容至1L。
2．酶試劑稱取過氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，疊氮鈉100mg，溶於磷酸鹽緩衝液80ml中，用1 mol/L NaOH調pH至7.0，用磷酸鹽緩衝液定容至100ml，置4℃保存，可穩定3個月。
3．酚溶液稱取重蒸餾酚100mg溶於蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。
4．酶酚混合試劑酶試劑及酚溶液等量混合，4℃可以存放1個月。
5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g於蒸餾水約800ml中，加溫助溶，冷卻後加蒸餾水定容至l L。
6．100mmol/L葡萄糖標準貯存液稱取已乾燥恆重的無水葡萄糖1.802g，溶於12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以後方可使用。
7．5mmol/L葡萄糖標準套用液吸取葡萄糖標準貯存液5.0ml放於100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。
操作步驟
1．自動分析法按儀器說明書的要求進行測定。
2．手工操作法取試管3支，按下表操作。
葡萄糖氧化酶法測血糖操作步驟
加入物(ml) 空白管標準管測定管
血清－－ 0.02
葡萄糖標準套用液－ 0.02 －
蒸餾水 0.02 －－
酶酚混合試劑 3.0 3.0 3.0
混勻，置37℃水浴中，保溫15min，在波長505nm處比色，以空白管調零，讀取標準管及測定管吸光度。
計算
用以下公式計算活性：
式中：E436――每分鐘吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)
Ew――67μl所用酶液中含酶的重量（0.00004958mg）
8.3――1μmol鄰-聯二茴香胺/mL的吸光度（436nm處）
2.067――反應混合物的總體積
GOD:
15min的平均值：
U1=181.23U/mg; U2=167.36U/ mg; U3=156.11U/ mg
4min的平均值：
U1=156.56U/ mg; U2=129.89U/ mg, U3=134.97U/ mg
【參考範圍】空腹血清葡萄糖為3.89～6.11mmol/L 。
實驗結論
葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下產生葡萄糖酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下使鄰聯甲苯胺生成藍色物質，此有色物質在625nm
臨床意義
1．生理性高血糖可見攝入高糖食物後，或情緒緊張腎上腺分泌增加時。
2．病理性高血糖
(1) 糖尿病：病理性高血糖常見於胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。
(2) 內分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進，腎上腺皮質功能及髓質功能亢進。引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多也會出現高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖，現已歸入特異性糖尿病中。
(3) 顱內壓增高：顱內壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內出血、腦膜炎等。
(4) 脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。
3．生理性低血糖見於飢餓和劇烈運動。
4．病理性低血糖(特發性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性、胰島素瘤等)
(1) 胰島β細胞增生或胰島β細胞瘤等，使胰島素分泌過多。
(2) 對抗胰島素的激素分泌不足，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質功能減退和甲狀腺功能減退而使生長素、腎上腺皮質激素分泌減少。
(3) 嚴重肝病患者，由於肝臟儲存糖原及糖異生等功能低下，肝臟不能有效地調節血糖。
注意事項
1．葡萄糖氧化酶對β-D葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約36%為α型，64%為β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的變旋反應。國外某些商品葡萄糖氧化酶試劑盒含有葡萄糖變旋酶，可加速這一反應，但在終點法中，延長孵育時間可達到完成自發變旋過程。新配製的葡萄糖標準液主要是α型，故須放置2h以上(最好過夜)，待變旋平衡後方可套用。
2．葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾物質濃度過高，可干擾過氧化物酶反應，造成結果假性偏低。
3．測定標本以草酸鉀－氟化鈉為抗凝劑的血漿較好。取草酸鉀6g，氟化鈉4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到試管內，在80℃以下烤乾使用，可使2～3ml血液在3～4天內不凝固並抑制糖分解。
4．本法用血量甚微，操作中應直接加標本至試劑中，再吸試劑反覆沖洗吸管，以保證結果可靠。
5．嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清應先製備無蛋白血濾液，然後再進行測定。
【評價】線性範圍至少可達22.24mmol/L，回收率94%～105%，批內CV為0.7%～2.0%。批間CV為2%左右，日間CV為2%～3%。葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法比較，73份標本葡萄糖氧化酶法均值為8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相關係數為0.9986，回歸方程y=1.0026x－2.29。
本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應式中可知第一步是特異反應，第二步特異性較差。誤差往往發生在反應的第二步。一些還原性物質如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質競爭過氧化氫，從而消耗反應過程中所產生的過氧化氫，產生競爭性抑制，使測定結果偏低。然而，在本法的測定條件下，溶血標本血紅蛋白的濃度達10g/L，黃疸標本膽紅素濃度達342μmol /L，維生素C小於30mg/L，均不影響測定結果。氟化鈉濃度達2g/L不干擾測定結果。標本中含尿素濃度達46.7mmol/L，尿酸濃度達2.95mmol/L，肌酐濃度達4.42mmol/L。半胱氨酸濃度達3.30mmol/L，甘油三酯濃度達5.6mmol/L，膽固醇4.40 mmol/L，對測定結果均無顯著影響。
左旋多巴100mg/L，維生素C 5mg/L以上，谷胱甘肽100mg/L時，可引起負誤差；半胱氨酸達10mmol/L時，產生相當0.72mmol/L葡萄糖的正誤差。
