血清補體測定

血清補體測定(sera complement assay)指測定血清中各補體成分及總補體含量的實驗,是測定機體免疫功能的一種方法。補體是廣泛分布於血漿中具有酶活性的一組不耐熱的球蛋白,約占球蛋白的10%,具有溶解靶細胞、促進吞噬、參與炎症反應等功能,同時補體還在免疫調節、清除免疫複合物、穩定機體內環境、參與變態反應及自身免疫性疾病起關鍵性作用。總補體活性和單個補體成分含量的變化,對某些疾病的診斷和療效觀察具有重要意義。

基本信息

原理

評估補體系統的常規檢測包括CH50和C3、C4、B因子、C1-INH等。
1. 總補體活性
根據補體能使兔抗羊紅細胞抗體(溶血素)致敏的羊紅細胞發生溶血,其溶血程度與總補體活性有關。總補體活性測定主要反映補體(C1~C9)經傳統途徑活化後的活性。
2. 血清補體C3
C3在補體經典激活途徑與旁路激活途徑中均發揮重要作用。
(1)單向免疫擴散法:將含有抗補體抗體的瓊脂鋪在玻璃板上,然後打孔,加抗原(補體)。在合適的溫度、濕度環境中,經過一定時間擴散,抗原與混勻在瓊脂中的抗體在比例合適處可形成清晰的沉澱環。沉澱環直徑大小與抗原的濃度在一定範圍內成正比。用標準抗原製成標準曲線,可查出被測抗原的含量。
(2)火箭免疫電泳法:當抗原與凝膠中抗體在電場作用下移動,逐漸形成梯度濃度,在抗原抗體比例適當時形成不溶性免疫複合物沉澱線而沉澱,隨著抗原量的減少,沉澱帶越來越窄,形成火箭峰樣沉澱帶,峰形高低與抗原量成正比。以峰高為縱坐標,濃度為橫坐標(對數坐標)繪製標準曲線,可求出待檢樣品內抗原濃度。
3. 血清補體C4
抗原在含有一定量的單一抗體瓊脂中進行電泳,在電場力的作用下,兩者比例合適時形成沉澱峰類似火箭而得名。沉澱峰的高度與抗原濃度成正比,與抗體濃度成反比,因此可以作為抗原定量試驗。主要反映補體的經典激活途徑。

臨床意義

1. C3、C4和(或)CH50均降低,提示激活了補體的經典途徑;C3低伴有正常的C4常提示激活了旁路途徑。
2. 各種腎病時補體變化可不同,急性鏈球菌感染後毛細血管內增生性腎小球腎炎,約85%患者在炎症早期血清補體多明顯下降,以CH50和C3下降最顯著,C4可正常,如急性鏈球菌感染後急性腎炎無併發症,C3在8?12周恢復正常,否則可能轉為慢性腎炎;膜增生性腎小球腎炎,由於患者血清記憶體在C3致腎炎因子 (C3NeF),激活了旁路途徑,引起C3持續而明顯降低。此外,約78%狼瘡性腎炎以及腎移植排異反應,C3、C4及CH50通常降低,病情穩定後可恢復正常;膜性腎病、IgA腎病、微小病變病,C3大多在正常範圍內。

正常參考範圍

1. 總補體活性
將新鮮的受檢血清作一系列稀釋後,分別加入抗體致敏綿羊紅細胞,經過一定時間反應,根據溶血程度判斷受檢血清中的總補體活性。現在常用50%溶血活性測定,即CH50。健康人正常參考值為50~100U/mL。
2. 血清補體C3
正常參考值:①單向免疫擴散法為0.80~1.20g/L。②火箭免疫電泳法正常參考值火箭免疫電泳法為0.9879~1.4559g/L。
3. 血清補體C4
正常參考值為130~370mg/L。

注意事項

1. 受檢血清必須新鮮,如放置室溫2h以上,會使補體活性下降。
2. 補體的溶血活性受多種因素的影響,如綿羊紅細胞濃度及致敏抗體的量等。在進行檢測時,需對反應的各個環節作嚴格控制。
3. CH50不能測定補體蛋白的絕對值,也不能測定備解素系統中的成分。

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