簡介
抗球蛋白參與的血凝試驗由Coombs於1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。所謂不完全抗體，多半是7S的IgG類抗體，能與相應的抗原牢固結合，但在一般條件下不出現可見反應。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連線與紅細胞表面抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集。經常用作試驗的有兩類方法。
直接Coombs試驗
直接Coombs試驗
將含球蛋白的試劑直接加到紅細胞表面結合抗體的細胞懸液中，即可見細胞凝集（圖13-6）。可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用於新生兒溶血症、自身免疫性溶血症、特發性自身免疫性貧血和醫源性溶血性疾病等的檢測。
間接Coombs試驗
用以檢測游離的血清中的不完全抗體。將受檢血清和具有待測不完全抗體相應抗原性的紅細胞相結合。再加入抗球蛋白抗體就可出現可見的紅細胞凝集（圖13-7）。此試驗多用於檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發現和避免新生兒溶血症的發生。亦可對紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測。
間接Coombs試驗
Coombs試驗除了廣泛套用於血液病的檢測外，還可採用專一特異性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補體血清等，分析結合於紅細胞上的不完全抗體的免疫球亞類。
有些病毒具有凝集某種(些)動物紅細胞的能力，稱為病毒的血凝，利用這種特性設計的試驗稱血球凝集(HA)試驗，以此來推測被檢材料中有無病毒存在，是非特異性的，但病毒的凝集紅細胞的能力可被相應的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗，具有特異性。通過HA-HI試驗，可用已知血清來鑑定未知病毒，也可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應抗體和滴定抗體的含量。
試驗方法
[目的要求]
掌握病毒HA和HI試驗的原理和基本操作方法，了解其實用價值。
[材料與試劑]
1. 96孔“U”形或“V”形微量反應板，50L定量移液器，滴頭，微型振盪器。
2. 生理鹽水，0.5% 雞紅細胞懸液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），新城疫陽性血清，被檢雞血清。
[實驗內容及操作方法]
血球凝集(HA)試驗
1. 在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50L生理鹽水。
2. 於左側第1孔加50L病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），混合均勻後，吸50L至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50L；第12孔為紅細胞對照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 雞紅細胞懸液50L，在振盪器上振盪，室溫下靜置後觀察結果（表4-1）。
表 4-1 病毒血凝試驗的操作方法（單位：L）
孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
病毒稀釋度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 對照
生理鹽水 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
病毒液 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
0.5%紅細胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
棄50
結果觀察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -
4. 結果判定：
從靜置後10 min開始觀察結果，待對照孔紅細胞已沉澱即可進行結果觀察。紅細胞全部凝集，沉於孔底，平鋪呈網狀，即為100% 凝集（++++），不凝集者（-）紅細胞沉於孔底呈點狀。
以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價，即為一個凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價為1:128，則l:128為1個血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個血凝單位，或將128/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個血凝單位。
