專利申請日2000.02.17
名稱脫氧核糖核苷三磷酸的製備方法
公開（公告）號CN1269422
公開（公告）日2000.10.11
類別化學；冶金
頒證日
優先權
申請（專利權）郭煥芳
地址102413北京市275信箱92分箱
發明（設計）人郭煥芳
國際申請
國際公布
進入國家日期
專利代理機構北京市科技專利事務所
代理人杜澄心
摘要
本發明涉及人工合成ＤＮＡ的必備前體原料的製備方法。本發明採用酶解—酶促—化學合成全新工藝。採用天然ＤＮＡ經溶液態脫氧核糖核酸酶的酶解可得到ＤＮＭＰ，ＤＮＭＰ收率為７０—９０％。ＤＮＭＰ在經ＤＮＭＰ酶反應一步後結合化學反應，可分別轉化為相應的ＤＮＴＰ，經層析法純化，以鈉鹽或鋇鹽的形式沉澱分離，可以得到純度為９５％—９７％的ＤＮＴＰ。本發明不僅使ＤＮＴＰ的生產工藝變的簡單，而且使生產量達到了摩爾級，適於工業生產，並且污染性極小。
主權項
權利要求書1．一種脫氧核糖核苷三磷酸的製備方法，包括以下步驟：（1）酶解：DNMP酶製備的培養基的基本組成和含量為5——10％的細菌培養用酵母提取物、0．5—2％的蛋白腖、4—6％的磷酸二氫鉀、2—5％的磷酸氫二鉀、10—15％的葡萄糖、0．5—3％的尿素、0．2％的氯化鈣、0．2％的氯化鋅，餘量為水溶液；以上培養基經滅菌、接種、收集和萃取直接獲得；萃取液不經純化可直接使用；將商品DNA分散在水中製得DNA水溶液，在所述DNA溶液中加入鋅離子使其濃度達到2×10—2—1×10—4M，根據脫氧核糖核酸酶的活性加入其量，酶解在30—55℃下進行；酶解5—15小時；（2）酶促：DNMP水溶液用10M的氫氧化鉀溶液調節PH為4—8，加入磷酸鹽，再加入金屬離子，用ATP作催化劑，根據DNMP酶的活性加入DNMP酶，50—55℃保溫48—96小時；（3）化學合成：酶促反應完成後，加入等量的醇類溶劑，2—5倍量的磷酸或磷酸鹽，20—40倍量的DCC，80—90℃下反應4—8小時；所得混合液為磷酸鹽，DNMP、DNDP、DNTP和多磷化合物；該溶液經過層析分離可得到純淨的DNTP。相關詞條
參考連結
1、http://www.helixnet.cn/archiver/tid-2721.html
2、http://scitech.people.com.cn/GB/other2137/
3、http://book.sina.com.cn/nzt/spi/gongzuodna/
