柱層析法
柱層析法又稱色層法或色譜法, 分離原理是根據物質在固定相上的吸附能力不同而進行分離,一般情況下極性大的物質易被固定相吸附,極性小的物質不易被固定相吸附,柱層析過程即是吸附、 解吸、 再吸附和再解吸的過程。柱層析中矽膠作為固定相對複雜有機化合物的分離具有較高的效率,因而在生物油柱層析分離中主要套用矽膠作為固定相。淋洗劑的選擇對柱層析分離效果具有很大的影響,在柱層析中對極性大的組分選用強極性的淋洗劑,對極性弱的組分則選用弱極性的淋洗劑進行洗脫。利用柱層析法分離生物油的研究,近年來得到了國內外學者的廣泛關注。
層析技術
層析技術又稱色譜技術、 色層技術, 該技術可用於定性、 定量和純化某些物質, 具有解析度高、 靈敏度高、 選擇性好的特點, 在各學科領域廣泛套用。層析法的種類很多, 但其原理一致, 即都是利用混合物各組分的理化性質( 吸附力、 分子形狀大小、 極性、 親和力、 分配係數等) 的差異,使各組分以不同程度分布在固定相和流動相,從而以不同速度移動而達到分離的目的。柱層析中矽膠作為固定相對複雜有機化合物的分離具有較高的效率,因而在生物油柱層析分離中主要套用矽膠作為固定相。淋洗劑的選擇對柱層析分離效果具有很大的影響,在柱層析中對極性大的組分選用強極性的淋洗劑,對極性弱的組分則選用弱極性的淋洗劑進行洗脫。
特點
柱層析法與其它分離方法相比較具有能耗低、 淋洗劑易於回收再利用和所得產品純度高等優點,但也存在分離工藝複雜、 所耗時間長和所需溶劑量大的缺點,在實際生產中,很難工業化。因此,簡化分離工藝、 縮短分離時間和提高溶劑利用率將成為今後改進柱層析分離法的重點。
舉例
氧化鋁柱層析法分離胡蘿蔔素
層析柱製備:取直徑為 1 cm × 16 cm 的玻璃層析柱,在其底部放少量棉花, 然後自柱的頂端裝入氧化鋁,待氧化鋁在柱中沉積約 8 cm 時, 於其柱床上加一小勺無水硫酸鈉。裝柱要均勻, 無斷層, 柱床表面要水平。
層析:用細吸管取提取液 3 ml, 沿柱內壁緩緩加入( 注意切勿破壞柱床面) ,待樣品 - 石油醚提取液全部進入層析柱時, 立即加入含 1% 丙酮石油醚沖洗,使吸附在柱上端的物質逐漸展開成為不同的色帶。