基因拼接方法

基因拼接方法是將不同的DNA片段連線在一起的方法。通常用於將合成法產生的不完整基因片段拼接成含有完整基因的DNA片段;或將基因片段與其他基因或調控序列相連線：或將基因片段與載體DNA片段連線在一起。

常用方法有：①粘性末端法，又稱限制性內切酶酶切法。要求兩種DNA分子具備同一個限制性內切酶切點，能產生互補的粘性末端。主要缺點是較難選擇重組質粒，而且當外源DNA片段的長度超過載體DNA較多時，形成的重組質粒的轉化率較低。②多聚dA-dT或dG-dC接尾法，是用末端轉移酶將兩種線性DNA分子的3′端分別加上dA或dT (dG或dC)多聚體，通過多聚體互補而結合在一起，用DNA連線酶處理，形成共價閉合的重組DNA分子。1972年用這種方法將病毒DNA與噬菌體DNA重組在一起。③平末端法，有些核酸內切酶切出的DNA分子是平末端，對DNA分子的單鏈末端亦可用核酸酶S1或DNA聚合酶Ⅰ來修平或補齊，然後用T4 DNA連線酶將不同片段連線起來。該法形成重組DNA分子的效率低，只及粘性末端法的1%。④人工接頭法，1976年發展起來的。首先用化學法合成具有某種限制性內切酶識別位點的序列，通過T4 DNA連線酶的作用連線到兩種待連線片段的平末端上，然後用這種限制性內切酶處理產生粘性末端，實現體外重組。