反轉錄RNA

反轉錄RNA(Reverse Transcription,RT-PCR)又稱為逆轉錄RNA。其原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。而獲得目的基因或檢測基因表達。使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級,使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術主要用於:分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。

1. Money 鼠白血病病毒(MMLV)反轉錄酶:有強的聚合酶活性,RNA酶H活性相對較弱。最適作用溫度為37℃。2. 禽成髓細胞瘤病毒(AMV)反轉錄酶:有強的聚合酶活性和RNA酶H活性。最適作用溫度為42℃。3.Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩定性反轉錄酶:在Mn2 存在下,允許高溫反轉錄RNA,以消除RNA模板的二級結構4.MMLV反轉錄酶的RNase H-突變體:商品名為SuperScript 此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉換成cDNA,這一特性允許從含二級結構的、低溫反轉錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA。

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