印跡技術

n n 5雜交

概念:印跡技術是指將待測核酸分子結合到一定固相支持物上的方法。
southern印跡
概念:將電泳分離的DNA片段轉移到一定的固相支持物上的過程。
過程:DNA分子被限制酶切，經瓊脂糖凝膠電泳，將DNA片段按照分子量大小分離，然後將含DNA片段的瓊脂糖凝膠變性，將其中單鏈DNA轉移到硝酸纖維濾膜或者其他故鄉支持物上。而DNA片段的相對位置保持不變。可做下一步雜交反應。
northern印跡
概念:將RNA變性及電泳分離後，將其轉移到固相支持物上的過程。
不能用鹼變性，防止水解。用甲醛變性。
southern印跡的步驟:
1從組織中提取DNA
2用特定的核酸內切酶酶切
3瓊脂糖凝膠電泳
4鹼變性
5中和反應
6轉膜
7固定
8雜交
9雜交信號檢測
northern印跡的步驟:
1從細胞中提取總RNA
2甲醛凝膠變性電泳
3轉膜
4固定
5雜交
6雜交信號檢測
western印跡的步驟
1蛋白質樣品製備
2SDS-PAGE電泳
3轉膜
4封閉
5一抗孵育
6二抗孵育
7顯色