卡邁舒（上海）生物科技有限公司提供各種屬ELISA試劑盒，權威質量保證，售後完善。服務於高校及免疫學科研單位。國內外專業ELISA,試劑指定供應商，竭誠為您提供更周到的服務更優質的產品。
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人胰島素生長因子1(IGF-1)ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人類胰島素生長因子1(IGF-1)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人類胰島素生長因子1(IGF-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液後，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於-20℃，避免反覆凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恆溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰櫃取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解後再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫乾燥）保存。
3.標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白；預處理後的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備註
微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無
標準品（160ng/mL） 0.6mL 0.6mL 按說明書進行稀釋
標準品稀釋液 6mL 3mL 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩衝液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2張 2張 無
說明書 1份 1份 無
自封袋 1個 1個 無
註：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：160、80、40、20、10、5ng/ml.
試劑的準備
20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min後甩盡孔內液體，在吸水紙上拍乾，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封袋密封放回4℃。
2.設定標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4.隨後標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍乾，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍乾，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪製標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關係數R值，大於等於0.9900。
2.靈敏度：最低檢測濃度小於1.0ng/mL。
3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.重複性：板內、板間變異係數均小於15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6個月
