原理
光是一種電磁波,具有一定的波長和頻率。可見光的波長範圍在400~760nm，紫外光為200~400nm，紅外光為760~500000nm。可見光因波長不同呈現不同顏色，這些波長在一定範圍內呈現不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發出的白光是複合光，是各種單色光的混合光。利用稜鏡可將白光分成按波長順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍、紫等，這就是光譜。有色物質溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現不同顏色，而某些無色物質能特徵性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質吸收由光源發出的某些波長的光可形成吸收光譜，由於物質的分子結構不同，對光的吸收能力不同，因此每種物質都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質的濃度成正比，分光光度法就是利用物質的這種吸收特徵對不同物質進行定性或定量分析的方法。
在比色分析中，有色物質溶液顏色的深度決定於入射光的強度、有色物質溶液的濃度及液層的厚度。當一束單色光照射溶液時，入射光強度愈強，溶液濃度愈大，液層厚度愈厚，溶液對光的吸收愈多，它們之間的關係，符合物質對光吸收的定量定律，即Lambert-Bear 定律。這就是分光光度法用於物質定量分析的理論依據。
注意事項
1、該儀器應放在乾燥的房間內，使用時放置在堅固平穩的工作檯上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲髮亮不穩定。
2、使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱鏇鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節鏇鈕的起始位置應該正確，然後再按通電源開關。
使用方法
721型分光光度計其波長範圍360～800nm，色散元件為三角棱形.
1.檢查儀器各調節鈕的起始位置是否正確，接通電源開關，打開樣品室暗箱蓋，使電錶指針處於“0”位，預熱20min後，再選擇須用的單色光波長和相應的放大靈敏度檔，用調“0”電位器調整電錶為T=0%。
2.蓋上樣品室蓋使光電管受光，推動試樣架拉手，使參比溶液池（溶液裝入4/5高度，置第一格）置於光路上，調節100%透射比調節器，使電錶指針指T=100%。
3.重複進行打開樣品室蓋，調0，蓋上樣品室蓋，調透射比為100%的操作至儀器穩定。
4.蓋上樣品室蓋，推動試樣架拉手，使樣品溶液池置於光路上，讀出吸光度值。讀數後應立即打開樣品室蓋。
5.測量完畢，取出比色皿，洗淨後倒置於濾紙上晾乾。各鏇鈕置於原來位置，電源開關置於“關”，拔下電源插頭。
6.放大器各檔的靈敏度為：“l” ×1倍；“2”×10倍；“3”×20倍，靈敏度依次增大。由於單色光波長不同時，光能量不同，需選不同的靈敏度檔。選擇原則是在能使參比溶液調到T= 100%處時，儘量使用靈敏度較低的檔，以提高儀器的穩定性。改變靈敏度檔後，應重新調“0”和“100”。
