一、描述
提供獨特的組份提取細胞及組織中的膜蛋白。其原理是裂解細胞後，先離心分離出質膜粗提物，再利用特殊的抽提Buffer，選擇性地分離提取膜蛋白，抽提Buffer含一種特殊的去污劑，在4℃時所有的蛋白質均可都溶於抽提Buffer，但在37℃時，抽提Buffer分為水相和去污相；此時親水性蛋白溶於水相，疏水的膜蛋白溶於去污劑相中，根椐該性質分離出膜蛋白。產物不僅含細胞膜蛋白，也含胞器質膜蛋白。提取方法簡單，可靠，快速。獲得的膜蛋白純度高，可用於PAGE電泳、WesternBlot、免疫共沉澱等後續研究。
二、規格
膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒 50assays
膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒 100assays
三、蛋白提取操作步驟
Ⅰ實體組織蛋白的提取
1、組織樣本（200～300mg）儘量去除脂肪組織和結締組織等非目的組織，於冰上剪碎；
2、組織樣本中加入1mLLysisBuffer（註：使用前，每mLLysisBuffer加入1μL蛋白酶抑制劑和1μL1MDTT），置玻璃均漿器冰上均質30～50次（或超聲破碎細胞，每次30S，3～4次，每次間隔1min），置於冰上冷卻。均質或超聲破碎細胞後應鏡檢，細胞破碎率不小於90％；
3、將均漿液轉移至冷的離心管中，於4℃,3000rpm離心10min，棄沉澱；
4、取上清轉移至新冷離心管中，於4℃,14000rpm離心30min，所得上清轉至新管中，即為胞漿蛋白，分裝冷凍保存；
5、取沉澱，加入1mL冷的抽提Buffer，渦旋振盪混勻後，4℃放置10～15min；
【註：因抽提Buffer在室溫時會分層，請務必於4℃混勻後加入】
6、4℃,3000rpm離心5min，取上清轉移至新管（注意勿將沉澱帶入上清），進行下步提取；
7、置於37℃水浴10min；
8、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
【註：建議使用進口透明性較好的微量離心管，可見下層為含膜蛋白的有機相。上下兩層因均為透明，只在交界處有一折光線，需仔細觀察才可見到。或室溫靜置30分鐘～1小時亦可見分層。以下亦同。】
9、取下層，加入500μL冰冷滅菌水，4℃放置5min；
10、置於37℃水浴10min；
11、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
12、取下層，加入500μL冰冷滅菌水，4℃放置5min；
13、置於37℃水浴10min；
14、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
15、最終得到的下層即為膜蛋白提取物，BCA法測定蛋白含量（因殘留有機相可能影響測定結果，此含量為相對參考值），分裝冷凍保存。
Ⅱ培養細胞蛋白提取
1、收集不少於1×107細胞，用冷PBS（pH7.4）洗滌細胞兩次（每次3000rpm離心5min）；
2、在細胞樣本中加入1mLLysisBuffer（註：使用前，每mLLysisBuffer加入1μL蛋白酶抑制劑和1μL1MDTT），置玻璃均漿器冰中均質30～50次（或超聲破碎細胞，每次30S，3～4次，每次間隔1min），置於冰上冷卻。均質或超聲破碎細胞後應鏡檢，細胞破碎率不小於90％；
3、將均漿液轉移至冷的離心管中，於4℃,3000rpm離心10min，棄沉澱；
4、取上清轉移至新冷離心管中，於4℃,14000rpm離心30min，所得上清轉至新管中，即為胞漿蛋白，分裝冷凍保存；
5、取沉澱，加入1mL冷的抽提Buffer，渦旋振盪混勻後，4℃放置10～15min；
【註：因抽提Buffer在室溫時會分層，請務必於4℃混勻後加入】
6、4℃,3000rpm離心5min，取上清轉移至新管（注意勿將沉澱帶入上清），進行下步提取；
7、置於37℃水浴10min；
8、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
【註：建議使用進口透明性較好的微量離心管，可見下層為含膜蛋白的有機相。上下兩層因均為透明，只在交界處有一折光線，需仔細觀察才可見到。或室溫靜置30分鐘～1小時亦可見分層。以下亦同。】
9、取下層，加入500μL冰冷滅菌水，4℃放置5min；
10、置於37℃水浴10min；
11、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
12、取下層，加入500μL冰冷滅菌水，4℃放置5min；
13、置於37℃水浴10min；
14、室溫,13000rpm離心5min，樣品分成上層和下層（含膜蛋白）；
15、最終得到的下層即為膜蛋白提取物，BCA法測定蛋白含量（因殘留有機相可能影響測定結果，此含量為相對參考值），分裝冷凍保存。
四、SDSPAGE電泳操作步驟
1、進行PAGE電泳前，取該提取物，每100μL膜蛋白提取物，加入約300μL的溶解Buffer和約100μL三氯乙酸（TCA）試劑，混勻後置冰上20～30min後，13000rpm，離心15min，儘可能除去上清；
2、沉澱加入1mL丙酮，室溫靜置10min後，13000rpm離心15min；
3、棄上清，沉澱真空旋乾或置冰上乾燥約10min（敞開離心管蓋），加入適當體積的LoadingBuffer（使用前每100μLLoadingBuffer加入2～5μL巰基乙醇）溶解，徹底分散（槍頭反覆吹吸或劇烈渦旋）；
【註：加入LoadingBuffer後如有部分難溶物，可取上清繼續上樣；如加入LoadingBuffer後溴酚藍轉呈黃色，此為少量TCA殘留所致，不影響電泳結果。請參照Marker標準。】
4、上樣進行SDSPAGE電泳。
