肉與肉製品聚磷酸鹽測定

肉與肉製品聚磷酸鹽測定

肉與肉製品中聚磷酸鹽的測定是利用三氯乙酸提取肉和肉製品中的聚磷酸鹽,提取液經乙醇、乙醚處理後,在微晶纖維素薄層層析板上分離,通過噴霧顯色,檢驗聚磷酸鹽。

原理

用三氯乙酸提取肉和肉製品中的聚磷酸鹽,提取液經乙醇、乙醚處理後,在微晶纖維素薄層層析板上分離,通過噴霧顯色,檢驗聚磷酸鹽。

試劑

如無特別說明,所有試劑均為分析純,試驗用水應符合GB/T 6682的要求。

(1)異丙醇。

(2)硝酸。

(3)四水合鉬酸銨溶液(75g/L):稱取75g四水合鉬酸銨,用水溶解並定容至1000mL。

(4)氫氧化氨。

(5)酒石酸。

(6)焦亞硫酸鈉(150g/L):稱取150g焦亞硫酸鈉,用水溶解並定容至1000mL。

(7)亞硫酸鈉(200g/L):稱取200g亞硫酸鈉,用水溶解並定容至1000mL。

(8)1-氨基-2-奈酚-2-磺酸。

(9)乙酸鈉。

(10)三氯乙酸溶液(135g/L):稱取135g三氯乙酸,用水溶解並定容至1000mL。

(11)乙醚。

(12)乙醇(95%)。

(13)可溶性澱粉。

(14)微晶纖維素。

(15)標準參比混合液

在100mL水中溶解下列物質:

磷酸二氫鈉:200mg;

焦磷酸四鈉:300mg;

三磷酸五鈉:200mg;

六偏磷酸鈉:200mg。

標準參比混合液在4℃條件下可穩定至少四周。

(16)展開劑:

將140mL異丙醇、40mL三氯乙酸溶液和0.6mL氫氧化銨混合均勻,保存於密封瓶中。

(17)顯色劑I:

量取50mL硝酸、50mL四水合鉬酸銨溶液,混合均勻,在上述溶液中溶解10g酒石酸(現用現配)。

(18)顯色劑II

將195mL焦亞硫酸鈉溶液和5mL亞硫酸鈉溶液混勻,然後稱取0.5g 1-氨基-2-奈酚-2-磺酸溶於上述溶液中,在稱取40g乙酸鈉溶於與此溶液中,該溶液貯存於密閉的棕色瓶中,可在4℃條件下保存一周。

儀器與設備

實驗室常規儀器及下列儀器。

(1)機械設備:用於試樣的均質。包括:絞肉機、斬拌機等肉類組織粉碎機。

(2)均漿器。

(3)塗布器(塗布厚度0.25mm)。

(4)玻璃板(10×20cm、5×20cm)。

(5)層析缸。

(6)微量注射器。

(7)吹風機(有冷、熱風擋)。

(8)噴霧器。

(9)乾燥箱

(10)乾燥器。

分析步驟

試樣準備

按GB∕T 9695.19取樣。,取有代表性的樣品不少於200 g。使用適當的機械設備將試樣均質。

均質後的試樣應儘快分析,若不立即分析,應密封冷藏貯存,防止變質和成分發生變化。存儲的試樣在啟用適應重新混勻。

薄層板的製備

將可溶性澱粉0.3g溶於90mL沸水中,冷卻後加入15g微晶纖維素粉,用均漿器勻漿1min。用塗布器把漿液塗在玻璃板上,鋪成0.25mm的漿層,在室溫下自然乾燥1h,然後在100℃烘箱中加熱10min,取出立即放入乾燥器中。也可用商品微晶纖維素板。

提取液的製備

將50mL 50℃溫水倒入裝有50g試樣的燒杯中,立即充分攪拌,加入10g三氯乙酸,徹底攪拌均勻。放入冰櫃冷卻1h後用扇形濾紙過濾。

若濾液渾濁,加入同體積的乙醚並搖勻,用吸管吸去乙醚,再加入同體積的乙醇,振搖1min,靜置數分鐘後在用扇形濾紙過濾。

薄層層析分離

將適量的展開劑倒入層析缸中,使深度為5-10mm,蓋上蓋,避光靜置30min。

用微量注射器吸取提取液3uL,若經過澄清處理的提取液取6uL,在距薄層板板底約兩厘米處點樣,每次點樣1uL,使點的直徑儘量小,邊點邊用吹風機冷風檔吹乾。

註:避免使用熱風吹乾,以防止磷酸鹽水解。

用同樣的方法,將標準參比液3uL點在同一塊板上,距樣品點1-2.5cm,距板底距離與樣品點一致。

打開層析缸,迅速而小心地把點好樣的薄層板放入缸中,蓋上蓋,在室溫下避光展開。

展開到溶劑前沿上升約10cm處,取出薄層板,放入60℃乾燥箱中乾燥10min,或在室溫下乾燥30min,或用吹風機冷風檔吹乾。

磷酸鹽的檢驗

將展開過的薄層板垂直立在通風櫥中,用噴霧器把顯色劑I均勻地噴在薄板上,使之顯現出黃斑。

用吹風機吹乾薄層板後,放入100℃乾燥箱中至少乾燥1h,把硝酸全部去除,將薄層板從乾燥箱中取出,證實是否有刺鼻的硝酸味道。

薄層板冷卻至室溫後,放入通風櫥中,噴顯色劑II,使之呈現出明顯的藍班。

結果

將試樣斑點與聚磷酸鹽標準混合液斑點的比移值相比較,計算其R。

正磷酸鹽的斑點經常可見.如果樣品中含有高濃度的磷酸鹽,也可以看見二磷酸鹽或聚合磷酸鹽的斑點。

參比混合液磷酸鹽的R值如下:

正磷酸鹽:0.70-0.80

焦磷酸鹽:0.35-0.50

三磷酸鹽:0.20-0.30

六偏磷酸鹽:0

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