等電聚焦電泳

等電聚焦電泳（IEF，isoelectric focusing electrophoresis）利用特殊的一種緩衝液（兩性電解質）在凝膠（常用聚丙烯醯胺凝膠）內製造一個pH梯度，電泳時每種蛋白質就將遷移到等於其等電點（pI）的pH處（此時此蛋白質不再帶有淨的正或負電荷），形成一個很窄的區帶。

名詞解釋

等電聚焦電泳（IFE，isoelectric focusing electrophoresis）利用特殊的一種緩衝液（兩性電解質）在凝膠（常用聚丙烯醯胺凝膠）內製造一個pH梯度，電泳時每種蛋白質就將遷移到等於其等電點（pI）的pH處（此時此蛋白質不再帶有淨的正或負電荷），形成一個很窄的區帶。

pH梯度的組成

pH梯度的組成方式有二種，一種是人工pH梯度，由於其不穩定，重複性差，現已不再使用。另一種是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負極間引入等電點

等電聚焦電泳

彼此接近的一系列兩性電解質的混合物，在正極端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在負極端引入鹼液，如氫氧化鈉、氨水等。電泳開始前兩性電解質的混合物pH為一均值，即各段介質中的pH相等，用pH0表示。電泳開始後，混合物中pH最低的分子，帶負電荷最多，pI1為其等電點，向正極移動速度最快，當移動到正極附近的酸液界面時，pH突然下降，甚至接近或稍低於PI1，這一分子不再向前移動而停留在此區域內。由於兩性電解質具有一定的緩衝能力，使其周圍一定的區域內介質的pH保持在它的等電點範圍。pH稍高的第二種兩性電解質，其等電點為pI2，也移向正極，由於pI2＞pI1，因此定位於第一種兩性電解質之後，這樣，經過一定時間後，具有不同等電點的兩性電解質按各自的等電點依次排列，形成了從正極到負極等電點遞增，由低到高的線性pH梯度。

載體介質

理想的兩性電解質載體應在pI處有足夠的緩衝能力及電導，前者保證pH梯度的穩定，後者允許一定的電流通過。不同pI的兩性電解質應有相似的電導係數從而使整個體系的電導均勻。兩性電解質的分子量要小，易於套用分子篩或透析方法將其與被分離的高分子物質分開，而且不應與被分離物質發生反應或使之變性。

pH梯度製作利用的兩性電解質（ampholyte，商品名為ampholine），是脂肪族多胺和多羧類的同系物，他們具有相近但不同的pKa和pI值。在外電場作用下，自然形成pH梯度。

凝膠可用：聚丙烯醯胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等