實驗原理
在pH5.2的緩衝液中,有Brij-35存在時,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可與白蛋白結合形成綠色複合物,在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標準比較,可求得血清中白蛋白含量。
試劑與器材
1.250g/LBrij-35溶液見BCG法
2.50mmol/L BCP貯存液稱取BCP 675mg溶於無水乙醇15ml中,當溶液變為橙色透明時,用無水乙醇稀釋至25ml。置4C冰櫃保存至少可穩定3個月。
3.2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸餾水稀釋至1L。
4.BCP試劑稱取無水醋酸鈉6.03g(或三結晶水的醋酸鈉10g)溶於蒸餾水950ml中,加Brij-35液1ml,BCP貯存液1ml,用2.5mol/L醋酸溶液調pH至5.20+0.03(約需10ml),加蒸餾水至1L(BCP貯存液也可在調好pH後再加)。在室溫可穩定一周。
5.0.154mol/L NaCl溶液稱取NaCl9g用蒸餾水溶解至1L
6.白蛋白標準液採用人白蛋白或定值,切不可用動物血清白蛋白。
操作步驟
1.生化自動分析儀分析法參數見有關儀器操作說明書。
2.手工操作法
操作:取試管3支,按表下表操作。
混勻,1min後在波長603nm處比色,用空白管調零,讀取測定管和標準管吸光度。
計算
血清白蛋白(g/L)=白蛋白標準液濃度(g/L)
參考範圍
正常成人36~46g/L。
注意事項
1.BCP溶液pH須嚴格控制在5.20±0.03範圍內
2.嚴重脂肪混濁血清對測定有干擾,應加做標本空白管(血清0.025ml加0.154mol/L NaCl溶液5.0ml)予以校正。
評價
本法反應最適pH為5.20,接近α-和β-球蛋白的等電點,抑制了這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應,故對測定白蛋白具有高特異性。此外,BCP與白蛋白的反應為即時完全反應,不受時間和溫度變化的影響,呈色後穩定1h以上。本法線性範圍5-50g/L,在10-40g呈線性良好,50g/l時稍偏低;CV為0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要優點,克服了BCG法的多數缺點,與火箭電泳法結果相一致,成為測定血清白蛋白燃料結合法中較好的一個方法。BCP與牛,豬(新鮮或凍乾)血清反應性僅為BCG反應的1/3,不適用於動物血清白蛋白作質量控制,機制尚待闡明。