別名
尿環磷酸腺苷
尿環磷腺苷的醫學檢查
檢查名稱
尿環磷腺苷
分類
體液和排泄物檢查 > 尿液檢查
尿環磷腺苷的測定原理
cAMP是一種小分子半抗原，其特異性抗體是以人工合成的2'-0-ScAMP-BSA結合物免疫動物所獲得。抗體對2'-0-位有取代基的cAMP的親和力較無取代基的cAMP約大100倍。為提高測定方法的靈敏度高，測定時應將[3H]標記cAMP，樣品和標準同時進行琥珀醯化反應，然後和抗體反應。從標準曲線查出樣品中的濃度。
試劑
（1）抗血清：
①ScAMP的合成：取cAMP20mg，琥珀酸酐100mg至反應瓶中，加去離子水2ml，三乙胺0.2ml，磁力攪拌反應30min。置真空乾燥內減壓除去三乙胺。加水20ml，放24h，用1mol/L NH4OH調至pH7.0。即刻用強鹼型聚苯乙烯陰離子交換柱層析。0.3mol/L甲酸淋洗，收集258nm流出液。合併，冷凍乾燥，產物為ScAMP。
②取ScAMP：經偶聯劑作用和BSA結合，作為免疫原，注射山羊或家兔，製備抗血清。
（2）[3H]-ScAMP：取[3H]-cAMP（中國原子能研究院產品）92.5kBq（2.5μCi）至瓶中，加琥珀酸酐5mg，去離子水0.1ml，三乙胺10μl，即刻混合，用力搖45s，加50mmol/L pH6.2醋酸緩衝液至10ml，臨用前配製。
（3）50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩衝液：取AR級無水醋酸鈉4.1g於800ml蒸餾水中，加茶鹼1.44g，溶解後用2mol/L醋酸調至pH6.2，加蒸餾水至1000ml，4℃保存。
（4）標準cAMP液（320nmol/L）：取純化cAMP1.11mg，加50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩衝液10ml，微溫至溶，放－20℃可長期保存。
（5）標準cAMP（320pmol/瓶）：取標準cAMP液0.2ml至10ml容量瓶中，加去離子水至10ml刻度。取5ml帶塞瓶，每瓶加50μl，放37℃乾燥，4℃水箱可保存3年內穩定。
（6）醯化試劑：取200mg/ml琥珀酸酐丙酮液2.5ml，三乙胺0.9ml混合，臨用前新配。
（7）閃爍液：取PPO 4g，POPOP 100mg，加AR級二甲苯1000ml。
操作方法
（1）尿液採集：稀釋後取尿液3ml，即刻加至預先放有0.25mol/L EDTA Na2 50μl的冷試管中，迅速混勻，放－20℃保存。
取尿液1ml至提取管中，加無水乙醇3ml，置快速混勻器上1min，離心，上清液傾至15ml蒸發皿中，向沉澱物中加75%乙醇3ml重複提取一次。上清液合併，置55℃水浴上吹乾。殘渣溶於0.5ml50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩衝液。
（2）組織樣品處理：活組織取得後即刻置氮氣中，快速稱取30～50mg於研磨器中，加50mmol/LpH6.2醋酸鹽緩衝液1ml，製成勻漿後即刻放沸水浴中3～5min。離心，取上清液放－20℃保存。
（3）標準工作液：取標準cAMP一瓶，加50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩衝液1ml。另取試管7隻，各加50mmol/L pH6.2醋酸緩衝液0.5ml，從標準液中吸出0.5ml至第一管，依次作倍比稀釋。此系列標準液50μl中含有0.125～8pmol。臨用前稀釋。
（4）10mm×100mm玻璃試管，NSB管加緩衝液150μl，S0管加緩衝液50μl，S1～7管加不同濃度標準液50μl測定管加待測樣品50μl。
（5）向每管加醯化試劑10μl，即刻用力搖5～10s。各管加[3H]-ScAMP液50μl。
（6）除NSB管外，各加抗血清100μl。混勻，放4℃反應2.5h。向每管加冷緩衝液1ml。
（7）將反應液滴加至聯接抽氣泵的微孔濾膜上抽濾，再加2ml冷緩衝液洗滌反應管，亦加至膜上抽濾。取下濾膜，放80℃ 30min。
（8）將濾膜放至預先加有5ml閃爍液的計數瓶中，放2h後在自動液體閃爍測量儀上測放射性。
（9）以B0/B為縱坐標，標準管濃度為橫坐標，在普通方格紙上作圖，可得y軸截距為1的直線。依樣品管的B0/B值，從標準曲線上得至相對應的濃度。再乘10得cAMPnmol/L。
正常值
3H-標記法：2.5～4.7nmol/mg·肌酐
化驗結果臨床意義
（1）升高：尿毒症、高鈣血症。
（2）降低：甲狀腺功能減退、支氣管哮喘、甲狀旁腺功能減退。
附註
（1）醯化試劑必須新鮮配製。琥珀酸酐丙酮液放4℃冰櫃保存不應超過1個月。
（2）微孔薄膜分離B·F成本低廉，閃爍液可重複使用5次以上。該法為非均相測量，測量放射性的效率約20%～25%。
相關疾病
高鈣血症、支氣管哮喘
