DAPI介紹
在螢光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發。當DAPI與雙股DNA結合時，最大吸收波長為358nm，最大發射波長為461nm，其發散光的波長範圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可以和RNA結合，但產生的螢光強度不及與DNA結合的結果，其發散光的波長範圍約在500nm左右。
DAPI的發散光為藍色，且DAPI和綠色螢光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染劑(紅色螢光染劑)的發散波長，僅有少部分重疊，研究員可以善用這項特性在單一的樣品上進行多重螢光染色。
DAPI能快速進入活細胞中與DNA結合，因此DAPI對生物體而言，也被視為一種毒性物質與致癌物。使用過程中應注意操作與拋棄的處理程式。
DAPI
中文名：4，6-聯脒-2-苯基吲哚(?)
英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride
分子式：C16H15N5
DAPI的結構結構式：
分子量：277.324
CAS number：28718-90-3
光譜性質： DAPI的最大激發波長為340nm，最大發射波長為488nm
與雙鏈DNA結合時最大吸收/最大發射為358 nm/461 nm；與RNA結合時，最大發射移動到400 nm左右。
染色原理
染色原理：
DAPI 為一種螢光染料，可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結合而發揮標記的作用，可以產生比DAPI自身強20多倍的螢光，和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色螢光的細胞，螢光顯微鏡觀察細胞標記的效率高(幾乎為100 %) ，且對活細胞無毒副作用。DAPI染色常用於細胞凋亡檢測，染色後用螢光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用於普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經熱激處理後用DAPI染色3分鐘，在螢光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態變化。
a、 正常的菸草細胞核：核形完整，染色質均勻。
b、 染色質固縮，向外周聚集，形成周邊化。
c、 染色質進一步固縮，形成很多顆粒物質。
d、 細胞核破裂形成碎片，核解體。
染色步驟
在細胞移植前，將DAPI 以一定的濃度加入培養基中，與細胞共同孵育過夜，用PBS 緩衝液漂洗至少6 次以洗掉未結合的DAPI，在用酶消化後離心收集細胞，加入DMEM 培養基製成細胞懸液以備用。
存儲條件：-20℃避光保存
每次使用，用量較少，可反覆凍融，無需分裝
注意事項：
1、DAPI強烈致癌，操作時要戴上手套。
2、貯存液用70%酒精配製，濃度100 µg/ml，可用黑紙包住，長期凍存。使用液按1:1000用PBS稀釋，最終濃度100 ng/ml。
3、DAPI是非常優秀的DNA染料，固定過和沒有固定過的活細胞均可用DAPI染色。
