細胞生長曲線

細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之後,經過短暫的懸浮然後貼壁,隨後度過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數生長期。在細胞達到飽和密度後,停止生長,進入平頂期,然後退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數生長期,呈平台狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/mL)對培養時間(h或d)作圖,即得生長曲線。

基本內容

細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之後,經過短暫的懸浮然後貼壁,隨後度過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數生長期。在細胞達到飽和密度後,停止生長,進入平頂期,然後退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指教生長期,呈平台狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/mL)對培養時間(h或d)作圖,即得生長曲線。

(一)細胞生長曲線測定(計數法)

1.取生長良好接近匯合的細胞,用胰酶消化,用新培養基製成細胞懸液後計數(見四、細胞傳代培養的實驗步驟)。如是非粘壁細胞,則離心棄舊培養基後,換上一定量的新鮮培養基然後製成細胞懸液計數。

2.根據細胞計數結果按每個小方瓶5×104/mL作傳代培養接種細胞,共接種21瓶細胞。

3.24 h後開始計數細胞,以後每隔24 h計數一次,每次取3瓶細胞,分別進行計數。計算平均值。連續計數7 d。

4.根據細胞計數結果,以單位細胞數(細胞數/mL)為縱坐標,以時間為橫坐標繪製生長曲線。(細胞計數方法請參照實驗三)

(二)細胞生長曲線測定(MTT法) 1.製備1 mL細胞懸液。空白對照以1 mL培養基代替細胞懸液。加入0.1 mL MTT於37℃孵育4 h。使MTT還原為藍紫色甲月贊結晶。

2.加1 mL DTW脫色液,37℃至少靜置30 min(甚至過液),使甲質顆粒充分溶解。

3.吸取200 μL該溶解液至96孔板孔中,在酶標儀上讀取OD值,檢測波長570 nm,參考波長630 nm。

4.每隔24 h測量一個點,每個點為3個平行樣品的平均值。

相關詞條

相關搜尋

熱門詞條

聯絡我們