Y-27632:Y-27632 是一種ATP競爭性的 ROCK-I 和 -百科知識中文網

描述

Y-27632是廣泛套用的，高效的Rho相關的捲曲蛋白形成絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶（ROCK）家族的小分子特異性抑制劑，包括p160ROCK(Ki=140nM)和ROCK-II(IC50=800nM)，同時也抑制PRK2，其IC50為600nM,其抑制作用是通過與ATP競爭結合催化位點來實現的。Y-27632可以阻止人胚胎幹細胞（hES）因分離誘導的細胞凋亡，在不影響hES的自我更新或者多潛能特性的前提下改善分離的hES細胞的存活率和克隆效率。Y-27632還可以鬆弛平滑肌和抑制前列腺平滑肌細胞的增殖。

化學信息

分子量：247.34分子式：C₁₄H₂₁N₃OCAS號：146986-50-7SMILES：O=C([C@@H]1CC[C@]([C@H](N)C)([H])CC1)NC2=CC=NC=C2純度:99.65%

生物活性

Y-27632是Rho相關激酶(ROCK)的一種有效且有選擇性的ATP競爭性抑制劑，

對ROCK1和ROCK2的Ki值分別為0.22µM和0.30µM。體外激酶檢測表明，與香櫞激酶和蛋白激酶 N相比，Y-27632對ROCK的選擇性高出20倍。研究表明，細胞用Y-27632處理會抑制肌球蛋白磷酸酶亞基1 (MYPT1)在Thr853和Thr696位點的ROCK 磷酸化，同時更大程度地抑制Thr853磷酸化。Y-27632會通過抑制Ca2+敏化選擇性地抑制平滑肌收縮。其他研究表明，Y-27632可抑制多代培養的人胚胎幹細胞中的分離誘導性凋亡，並提高克隆效率。

作用機制

Y-27632對小鼠骨髓間充質幹細胞凋亡的影響

方法：原代分離培養小鼠骨髓單個核細胞，套用流式細胞術對細胞CD29、

CD44、CD90、CD34表面標誌進行檢測。成骨、成脂肪、成軟骨分化後分別進行茜素紅、油紅O及甲苯胺藍染色。將第3代細胞隨機分為3組：對照組、模型組（無血清）、Y－27632組（無血清＋10μmol／L Y－27632），分別於培養後24、48、72h收集細胞進行流式細胞儀TUNEL法觀察各組細胞凋亡率，培養後24hWestern blot法檢測ROCK1及cleavedcaspase 3表達。結果分離的骨髓單個核細胞CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（－），三系分化後茜素紅染色（＋），油紅O染色（＋），甲苯胺藍染色（＋）。Y－27632能明顯降低由於缺血清培養導致的BMSCs的凋亡率（P＜0.01），Y－27632能夠明顯降低ROCK及cleaved－caspase 3表達（P＜0.01）。結論分離的骨髓單個核細胞就是骨髓間充質幹細胞。Y－27632能夠抑制由於缺血清培養導致的小鼠骨髓間充質幹細胞的凋亡。

Y-27632促進大鼠成骨細胞早期分化

方法：取新生SD大鼠頭蓋骨組織體外培養細胞傳至第3代，給予Rho激酶抑制劑Y-27632進行干預。採用羅丹明標記的鬼筆環肽對細胞骨架進行細胞化學染色。結果顯示，培養1 d和2d，Rho激酶抑制劑Y-27632處理的細胞呈現多角形，並伴有部分偽足形成。細胞培養4d和7 d，Y-27632處理的細胞鹼性磷酸酶（alkalinephosphatase, ALP）活性明顯增加（P<0.01）。實時定量PCR揭示，加Y-27632處理細胞的骨分化相關基因Runx2、Alp、β-catenin(β-cat)、osteopontin(Opn)的mRNA表達水平均顯著高於對照細胞（P<0.05或P<0.01）。以上結果證明，Rho激酶抑制劑Y27632能夠影響大鼠成骨細胞的形態，並有促進其分化作用。本研究為骨代謝疾病及組織工程的研究提供了新的線索和啟示。

Y-27632對TGF-β1/CTGF通路的影響

Y-27632為嘧啶衍生物,是一種近年來合成的特異性Rho相關螺鏇捲曲蛋白激酶(Rhoassociatedcoiled-coilformingproteinkinase,ROCK)抑制劑,能通過調控ROC K介導的多種生物效應從而抑制肝纖維化的形成.研究發現,轉化生長因子β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)/結締組織生長因子(connectivetissuegrowth factor,CTGF)通路參與肝纖維化的形成,TGF-β1誘導其下游效應分子CTGF表達,促使細胞外基質生成增多,導致肝纖維化.Y-27632具有抑制TGF-β1和CTGF表達的作用,本文從ROCK抑制劑Y-27632對TGF-β1/CTGF通路的影響來闡述Y-27632的抗纖維化作用,藉此更深入的了解Y-27632的作用靶點,為肝纖維化的靶向治療提供理論依據。

Y-27632