原理
寵物抗原試紙一般採用雙抗體夾心方式的免疫膠體金層析技術,屬於一步式固相膜反應。試紙被滴加樣品溶液後,溶液中的抗原隨溶液爬行至結合墊處,與其中的膠體金標記抗體1反應形成紅色的抗原抗體複合物,然後繼續層析移動向前。在觀察視窗的檢測線(T)處,紅色免疫複合物中的抗原被此處預先包被抗體2捕獲並截留下來,隨著紅色複合物截留量增多,逐漸形成一條紅線,因此根據紅色T線的出現即可判定樣品溶液為陽性。如果樣品中沒有抗原,則不形成免疫抗原抗體複合物,流過T處,不發生捕獲截留,T處保持白色,判定為陰性。
取樣方法
犬瘟熱病毒檢測應取犬鼻、眼分泌物、唾液、血清、肛門腺分泌物作為檢測樣本。
檢測操作方法
檢測試紙卡從鋁箔袋取出後,要求平放在桌面上,用吸管吸取樣品溶液向加樣孔內逐滴地滴加3~4滴,反應一般在5-20分鐘內完成。
若糞便樣品較混濁,可能會阻塞樣品孔處樣品流動,某些血清粘稠度過高時會導致層析流動緩慢,這種情況下可補加1-2滴稀釋液以推動樣品順暢地流動,保證紅色的溶液順利地爬上並流過反應膜,這樣能得到較好的反應結果;
糞便取樣後要充分與稀釋液混勻,靜置1分鐘,然後取上清液。注意取樣溶液中不應含糞渣及懸浮雜質,它會將樣品孔內的孔隙堵塞,溶液很難滲進去,導致溶液不能爬上觀察窗內的反應膜,層析流向反應膜的對面,直至膜面從紅色恢復到白色,反應線清晰地顯現出來。因此反應無法順利進行,可能出現白板現象。
操作注意事項:
· 加樣前,反應樣品與稀釋液應充分混勻。
· 逐滴(間隔2秒)滴加樣品液,3—4滴,直到顯示窗處有紅色液體流出。
· 當滴加樣品3-4滴30秒鐘後觀察窗邊緣還未出現紅色溶液,則酌情補加2滴。
· 為避免出現溶液漫流,影響反應信號等現象,不宜一次性加滿反應孔。
結果判定
寵物抗原檢測試紙一般採用抗體夾心方法。夾心法試紙反應結果判讀說明如下:
①陽性:在質控線(C)及檢測線(T)處,均出現紫紅色條帶,判定為陽性;
②陰性:在質控線(C)處,出現紫紅色條帶,檢測線(T)處沒有出現紫紅色條帶,判定為陰性;
③無效:質控線(C)沒有出現紅色條帶,無論T線出現紅色條帶與否,判定試紙條失效。