己烯雌酚軟膏是以硬酯酸、羊毛脂、丙二醇、甘油等為基質的乳劑型基質軟膏。臨床上用於治療老年性陰道炎、外陰炎。己烯雌酚為性激素類藥,控制其含量非常重要。
1 儀器與試藥
LC-10AD高效液相色譜儀系列。
己烯雌酚對照品由中國藥品生物製品檢定所提供;己烯雌酚軟膏及空白基質均由江西省婦幼保健院提供。甲醇為色譜純,水為重蒸水。
2 色譜條件
PinnacleODS柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-水(70∶30),流速0.8mL.min-1;檢測波長241nm,靈敏度0.01AUFS,進樣量20μL。
3 線性關係
精密稱取己烯雌酚對照品20.3mg於25mL量瓶中,加乙醇溶解並稀釋至刻度。精密量取2mL於25mL量瓶中。加乙醇稀釋至刻度。分別取1,2,3,4,5,6mL於10mL量瓶中,加乙醇稀釋至刻度。取20μL進樣,記錄色譜圖,以峰面積A對濃度C回歸,回歸方程為
A=9938C-114.8 r=0.9995說明濃度在6.5~39μg.mL-1範圍內線性關係良好。
4 精密度試驗
取26μg.mL-1己烯雌酚對照品溶液20μL,重複進樣5次,記錄峰面積,結果RSD=0.4%。
5 樣品測定
精密稱取己烯雌酚軟膏2.5g於100mL量瓶中,加乙醇適量,超聲提取1h後,冷至室溫,加乙醇至刻度。取續濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液及對照品溶液(26μg.mL-1)各20μL分別進樣。記錄色譜圖(圖1)。按外標法計算樣品的含量。結果3批樣品含量分別為93.2%,90.8%,91.7%(n=3)。
1.己烯雌酚
6 重複性試驗
取同批樣品5份,按樣品測定項下方法測定,並計算含量,結果RSD=2.0%。
7 回收率試驗
取已知含量同一樣品5份,各約1.25g,精密稱定。加入己烯雌酚對照品1.26mg,按樣品測定項下方法測定,結果平均回收率102.4%,RSD=1.4%(n=5)。
8 討論
曾採用鹼水提,酸化後氯仿提,蒸乾氯仿乙醇定容後測定[1],結果降解產物含量高,且操作較繁瑣。經比較,用乙醇提取較好。
提取時間考察了超聲提取30,60,90min,結果60min以後提取量不再增加。
流動相甲醇-水的比例經實驗對比,以70∶30為最理想。在本系統內,己烯雌酚保留時間8.3min,理論塔板數達1000,各峰分離度均大於1.5。基質不影響含量測定。